[发明专利]一种利用动物软骨制备硫酸软骨素和胶原蛋白多肽的方法

权利要求书

1.一种利用动物软骨制备硫酸软骨素和胶原蛋白多肽的方法，其特征在于所述方法为：将动物软骨原料粉碎得软骨粉末，软骨粉末用蛋白酶水解后超滤浓缩得到浓缩液，将浓缩液过阴离子交换树脂柱，收集流出液A，再用纯水洗脱，收集水洗液B，流出液A与水洗液B合并后超滤浓缩，再喷雾干燥制得胶原蛋白多肽；再将阴离子交换树脂柱用NaCl溶液洗脱，洗脱液超滤浓缩后经醇沉、脱水、干燥制得硫酸软骨素。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)将动物软骨原料粉碎至平均粒径为0.1-10mm，得软骨粉末；软骨粉末加蛋白酶和水，调节pH值至所述蛋白酶的最适pH值，进行酶解反应，控制酶解温度在30-55℃之间，搅拌反应2-12h；然后加热灭酶，冷却后过滤取滤液，调pH值为中性，采用截留分子量为1000-8000道尔顿的超滤膜超滤浓缩得到浓缩液，所述浓缩液中硫酸软骨素的质量百分浓度为1～20％；所述蛋白酶为下列之一：中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或酸性蛋白酶；所述蛋白酶的用量为软骨粉末质量的0.1-1.5％；水的用量为软骨粉末质量5-30倍；

(2)步骤(1)所得浓缩液调pH值至2.0-7.0，过阴离子交换树脂柱，收集流出液A；用纯水洗脱，收集水洗液B，流出液A与水洗液B合并，调节pH值为中性，采用截留分子量为1000-8000道尔顿的超滤膜超滤浓缩至蛋白的质量浓度为5-30％，再喷雾干燥得胶原蛋白多肽；

(3)步骤(2)的阴离子交换树脂柱再用1-6mol/L NaCl溶液为洗脱剂，对硫酸软骨素进行洗脱，收集洗脱液，调节pH值为中性，采用截留分子量为1000-8000道尔顿的超滤膜超滤浓缩至硫酸软骨素的质量浓度为1-30％，经醇沉，脱水，干燥，制得硫酸软骨素。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述动物软骨原料是经晒干或烘干后含水量低于15wt％的动物软骨。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述阴离子交换树脂为下列之一：D315、D202、D307、D208、D215、D218、D301或D354。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，所述阴离子交换树脂的湿树脂体积以浓缩液中硫酸软骨素的质量计为10-30L/kg。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，所述浓缩液调pH值至2.0-7.0，过阴离子交换树脂柱，所述过阴离子交换树脂的流速为0.1-10VB/h。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，用纯水洗脱，所述的纯水通过阴离子交换树脂的流速为0.1-15VB/h，所述纯水的用量为0.1-10倍柱体积。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，NaCl溶液的用量为1-20倍柱体积，通过阴离子交换树脂的流速为0.1-15VB/h。

9.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中，所述加热灭酶是在70-100℃，保温10-60min的条件下，进行灭酶。

10.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，所述醇沉、脱水、干燥按以下方法操作：边搅拌边加入体积为超滤浓缩后的浓缩液体积的3～4倍的体积百分浓度95％乙醇水溶液，取沉淀，再加入体积百分浓度95％乙醇水溶液脱水，最后，真空干燥得到硫酸软骨素。