[发明专利]一种利用酶联板进行多指标酶联免疫吸附检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多指标酶联免疫吸附检测方法。

背景技术

酶联免疫吸附检测(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。

现有的ELISA检测方法都是单一指标的检测，但随着科技的进步，体外诊断行业的发展，人民生活水平的提高以及对医疗健康的重视，疾病的诊断自然成为国家重点扶持和发展的领域之一。许多单一指标的诊断已不能使医生为疾病的诊疗做出科学的判断，往往错过了最佳的治疗期，使病情进一步恶化，甚至病人因此失去了生命。而多指标诊断(如肿瘤标志物、TORCH、传染病、食物过敏原、自身抗体等)可为医生提供更多的判断依据，从而做出准确的判断，为及时进行有效的治疗提供有力的帮助。因此，多指标诊断已成为体外诊断行业发展的另一方向，具有广阔的市场。

多指标诊断的常用方法为芯片法，但由于芯片法需要昂贵的仪器设备，属于微量检测，对环境和操作要求很高，需专业的操作人员，而且实验的重复性很差，直接影响到临床的推广使用。目前能用于临床检测芯片产品少之又少，大部分产品也仅限于科研使用。芯片法虽然是多指标检测的常用方法，各国都投入了巨大的资金和人力，但由于技术还不是很成熟，短期内在临床推广还困难重重。因此，目前临床中进行多指标检测常常只能采取多种单一指标检测的试剂盒同时检测的方法，但该方法操作繁复，成本昂贵，费时又费力，不能较好地满足临床应用的要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种利用酶联板进行多指标酶联免疫吸附检测的方法。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

一种利用酶联板进行多指标酶联免疫吸附检测的方法，其采用的酶联板通过如下步骤制备得到：

(1)、将不同种类的抗原或抗体以及它们的混合标准抗原或抗体按浓度0.01～50μg/ml溶于碳酸、磷酸或醋酸缓冲液中，混匀，制得包被液；

(2)、将步骤(1)制备的包被液按设定的排列顺序加入到酶标板的孔内，每孔加一种包被液，4℃孵育过夜，或37℃孵育1～5小时，进行包被；

(3)、用溶解有吐温的磷酸盐缓冲液清洗酶标板，之后，再在酶标板的孔内加入封闭液，4℃孵育过夜，或在室温或37℃孵育1～5小时，进行封闭；封闭后，弃去孔内液体，干燥，即得酶联板。

优选地，步骤(2)中，每孔内加入的包被液的体积为50～200μl。步骤(3)中，每孔内加入的封闭液的体积为50～200μl。

根据本发明的进一步实施方案：所述检测方法依次包括如下步骤：

(1)、取酶联板，在其孔中加入血清稀释液、标准品、阳性质控和稀释了的血清样本；

(2)、用封口膜或塑料袋封闭酶联板，置室温或37℃孵育0.5～3小时；

(3)、用清洗液清洗酶联板的孔，然后加入酶结合液，置室温或37℃孵育0.5～3小时；

(4)、用清洗液清洗酶联板的孔，在所有反应孔中加入显色液，用封口膜或塑料袋封闭酶联板，置室温或37℃孵育10～60分钟；

(5)、在所有孔内加入终止液，用酶标仪测定吸光度值。

根据本发明，多指标酶联免疫吸附检测的检测原理与单一指标酶联免疫吸附检测的检测原理是相同的，因此，上述的血清稀释液、标准品、阳性质控、清洗液、酶结合液、显色液、终止液等溶液均可以参照单一指标酶联免疫吸附检测所用的溶液来配制。

根据一个具体方面，阳性质控由阳性血清溶于缓冲液(例如磷酸盐缓冲液)中制得。酶结合液的制备过程为：称取载体蛋白或量取动物血清，溶于缓冲液(例如磷酸盐缓冲液)中，配制酶稀释液，然后将辣根过氧化物标记物溶于酶稀释液中配制得到所述酶结合液。显色液由底物液A和底物液B在使用前混合得到，其中底物液A由四甲基联苯胺溶于柠檬酸缓冲液中得到；所述底物液B由过氧化氢溶于醋酸盐缓冲液中得到。

样本稀释液由载体蛋白或动物血清溶于缓冲液(例如磷酸盐缓冲液)中得到。清洗液由吐温溶于磷酸盐缓冲液中，并稀释后得到。终止液由硫酸溶于纯水中制得。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：