[发明专利]测定凝固抑制剂的方法

权利要求书

1.一种在样品中测定蛋白水解活性凝固因子的抑制剂的方法，所述方法包括以下步骤：

a）提供和孵育反应混合物，所述反应混合物包含

i. 等分试样的样品，

ii. 确定量的蛋白水解活性凝固因子，

iii. 至少一种配体，所述配体与蛋白水解活性凝固因子的活性位点结合但不被后者在肽键处切割，

iv. 信号产生系统的第一和第二成分，二者以这样的方式共同作用，即当所述信号产生系统的所述第一和第二成分变得彼此极为接近时产生可检测的信号，且其中蛋白水解活性凝固因子与信号产生系统的第一成分结合，或在孵育期间与其结合，且其中配体与信号产生系统的第二成分结合，或在孵育期间与其结合；

b）测量信号产生系统的信号，其中所述信号幅度与样品中的抑制剂浓度成反比。

2.根据权利要求1的方法，其中与蛋白水解活性凝固因子的活性位点结合的所述配体具有Ki=10^-13 - 10^-4 M的与蛋白水解活性凝固因子的结合亲和力。

3.根据权利要求1和2中任一项的方法，其中所述信号产生系统的第一和第二成分各个包含微粒状固相，且其中测量在所述反应混合物中的所述微粒状固相的聚集。

4.根据权利要求1和2中任一项的方法，其中所述信号产生系统的第一成分是化学发光剂，且所述信号产生系统的第二成分是光敏剂，反之亦然，且其中测量在所述反应混合物中的化学发光。

5.根据权利要求4的方法，其中所述化学发光剂与第一微粒状固相结合和/或所述光敏剂与第二微粒状固相结合。

6.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中所述配体具有第一结合对A/B的第一结合配偶体A，且其中所述信号产生系统的所述第二成分具有所述第一结合对A/B的第二结合配偶体B，且其中所述配体由于所述结合配偶体A和B的结合与所述信号产生系统的所述第二成分结合，或在孵育期间与其结合。

7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其中所述配体是肽衍生物。

8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其中所述配体是肽衍生物，所述肽衍生物具有选自醛、酮、三氟甲基酮、α-酮羧酸、α-酮酰胺、α-酮酯、酯、硼酸、氯甲基酮和磺酰氟的羧基端基团。

9.根据权利要求6的方法，其中选择所述结合配偶体A和B使其形成选自FLAG标签/抗FLAG标签抗体，HIS标签/抗HIS标签抗体，荧光素/抗荧光素抗体，生物素/抗生物素和生物素/链霉抗生物素的结合对A/B。

10.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述蛋白水解活性凝固因子具有第二结合对X/Y的第一结合配偶体X，且其中所述第二结合对X/Y的第二结合配偶体Y与所述信号产生系统的所述第一成分结合，且其中所述蛋白水解活性凝固因子由于所述结合配偶体X和Y的结合与所述信号产生系统的所述第一成分结合，或在孵育期间与其结合。

11.根据前述权利要求中任一项的用于测定凝血酶抑制剂的方法，其中提供和孵育反应混合物，所述反应混合物包含确定量的蛋白水解活性凝固因子：凝血酶。

12.根据权利要求11的方法，其中提供和孵育反应混合物，所述反应混合物包含与凝血酶的活性位点可逆结合但不因此被切割的肽：生物素基-Ttds-D-Phe-Pro-Arg-H。

13.根据权利要求11和12中任一项的用于测量凝血酶抑制剂的方法，所述凝血酶抑制剂选自肝素、肝素衍生物、比伐卢定、水蛭素、达比加群、阿加曲班、美拉加群、希美加群、来匹卢定、MCC-977、SSR-182289、TGN-255、TGN-167、ARC-183和odiparcil。

14.根据权利要求1至10中任一项的用于测定因子Xa抑制剂的方法，其中提供和孵育反应混合物，所述反应混合物包含确定量的蛋白水解活性凝固因子：因子Xa。

15.根据权利要求14的用于测定因子Xa抑制剂的方法，所述因子Xa抑制剂来自肝素、肝素衍生物例如磺达肝癸钠、利伐沙班、阿哌沙班、奥米沙班、LY 517717、YM 153、DU-176b、DX-9065a和KFA-1982。