[发明专利]来曲唑在制备激素诱导犊牛卵泡发育药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型的激素诱导犊牛卵泡发育方法，具体地说，涉及来曲唑在制备激素诱导犊牛卵泡发育药物中的应用，可用于利用激素诱导后采集的卵母细胞生产转基因克隆家畜、家畜育种及濒危物种的保护。属于应用型胚胎生物技术领域。

背景技术

激素诱导犊牛卵泡发育的理论基础来源于成年母牛超排技术，即通过外源促性腺激素处理犊牛诱导卵巢卵泡发育，增加可利用的卵母细胞数，同时结合活体采卵技术体外生产高发育能力的胚胎，并通过胚胎移植技术植入发情成年受体母牛，附植后成功经历全期发育并产犊。此项技术具有独特的技术优势，能够超常规快速扩繁重要稀缺品种，突破国外对相关种质资源的垄断；大幅度缩短家畜品种培育时间，快速改变我国自主培育品种缺少的局面；充分挖掘种畜生殖潜力，迅速扩大良种覆盖率；降低良种成本，有效促进农民增收，减少饲养总量，切实缓解生态压力。

此项技术国外研究较早，始于上世纪40年代。随着超声波等活体采卵技术的应用、犊牛卵母细胞体外培养体系的建立与完善，此项技术得到迅猛的发展。目前为止，国内外学者已从供体的选择、超排年龄、激素处理方案、激素处理后卵巢反应、重复超排、卵母细胞发育能力、胚胎冷冻及遗传等角度进行了研究。实践证明：经过激素处理犊牛能够获得大量的卵母细胞，卵母细胞在体外受精后能够形成具有发育能力的胚胎，且一些研究证明，体外生产的胚胎经移植后获得了健康的后代。但是由于诱导选用的激素种类、供体牛的年龄、体况、生理状态、环境及营养等因素的影响，激素处理后的卵巢反应同成年牛一样，个体间差异很大，尚缺少高效、稳定的激素诱导方案，逐渐成为该项技术推广应用的瓶颈因素。

自然条件下，犊牛出生后5d新生卵巢含有75000到300000个卵母细胞，发育至2月龄阶段卵巢有腔卵泡数量可达50个，但在整个生命阶段经自然发情排出的卵子数量很少，大量的卵泡都在发育的不同阶段闭锁退化，导致卵泡遗传资源的巨大浪费。利用激素诱导促使犊牛卵巢卵泡发育，同时结合体外胚胎生产技术体系，可以加快良种扩繁速度，大幅缩短世代间隔。

目前使用的犊牛激素诱导方案仍然借鉴于成年牛的超排方案，主要是卵泡刺激素(FSH)递减剂量连续注射2-3d；基于犊牛的体重低于成年牛，同时考虑其卵巢内部对促性腺激素的反馈抑制机制的形成尚未建立，一般FSH的使用剂量低于成年牛。综合现有文献结果表明：犊牛在2-3月龄激素诱导能够获得较好的卵巢反应，且一些研究在使用阴道栓制剂(CIDR)的同时，连续2d使用FSH(40，30，30，30mg)获得了较多的卵母细胞，但个体间差异依然很大。因此，激素诱导犊牛卵泡发育亟需新型的高效、稳定的方案来克服个体差异大的瓶颈因素，充分挖掘良种犊牛在卵泡闭锁前丰富的种质资源。

来曲唑(LE)为非甾体类第三代芳香化酶抑制剂，最早应用于人绝经期乳腺癌的临床治疗。近年来动物实验和临床研究表明LE具有促排卵作用。促排机理可能通过抑制芳香化酶的活性，阻碍雄激素向雌二醇的转化，降低机体内雌激素水平，从而解除雌激素对下丘脑和(或)垂体的负反馈作用，使垂体促性腺激素分泌增加，促进卵泡的发育和排卵；另外卵巢内雄激素暂时性的增多，从而增加卵巢内卵泡对FSH的敏感性，同时卵巢内雄激素的增加能够刺激胰岛素样生长因子1(IGF1)以及内分泌、旁分泌因子与FSH协同作用促进卵泡发育和排卵。LE为口服剂型，生物利用度高达99.9％，具有高度选择性，可阻断98％以上的芳香化酶活性，半衰期较短，代谢速度快，无副作用。大量的研究表明，LE与FSH联合使用提高了超排效率，是一种新型的促排卵药物，目前已广泛应用于人的促排卵治疗及实验动物研究，但是在犊牛激素诱导卵泡发育的方案改进方面尚无应用报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种来曲唑在制备激素诱导犊牛卵泡发育药物及辅助药物中的应用。

本发明的另一目的是提供一种诱导犊牛卵泡发育的方法。

为了实现本发明目的，本发明提供来曲唑(LE)在制备激素诱导犊牛卵泡发育药物及辅助药物中的应用。

本发明来曲唑与卵泡刺激素(FSH)联合用于制备激素诱导犊牛卵泡发育药物。

本发明研究人员经过研究发现，来曲唑(LE)可提高卵母细胞获取效率，增加可利用的卵母细胞数量，且半衰期较短，代谢速度快，无副作用。

本发明利用LE对内分泌及旁分泌的影响及卵巢卵泡募集的作用，在常规激素诱导方法使用FSH的同时结合LE，促进犊牛卵泡发育，通过采卵技术提高卵母细胞获取效率，充分挖掘良种牛在卵泡闭锁前丰富的种质资源，加速良种选育及扩繁技术体系，大幅度提高育种效率和技术水平。