[发明专利]一种双链核苷酸序列、含其的重组质粒及其构建方法

权利要求书

1.一种双链核苷酸序列，所述核苷酸序列的两条单链核苷酸序列分别如式1和式2所示：

5’-(X)_n1GAGACC(X)_n2TTTAAA(X)_n3GGTCTC(X)_n4-3’

式1

5’-(Y)_n5GAGACC(Y)_n6TTTAAA(Y)_n7GGTCTC(Y)_n8-3’

式2

其中，所述式1中的X为选自A、T、C或G，n1为1至20的整数，n2为1至20的整数，n3为1至20的整数，n4为1至20的整数，条件是(X)_n1、(X)_n2、(X)_n3或(X)_n4均不包含GAGACC、TTTAAA或GGTCTC；

所述式2中的Y为选自A、T、C或G，n5为1至20的整数，n6为1至20的整数，n7为1至20的整数，n8为1至20的整数，条件是(Y)_n5、(Y)_n6、(Y)_n7或(Y)_n8均不包含GAGACC、TTTAAA或GGTCTC；并且

n2＝n7，(X)_n2与(Y)_n7互补；n3＝n6，(X)_n3与(Y)_n6互补。

2.根据权利要求1所述的双链核苷酸序列，其特征在于，n2和n7为6至20的整数；n3和n6为6至20的整数；

优选地，所述(X)_n1为TGCTG，所述(X)_n4为A；

优选地，所述(Y)_n5为CCTGT，所述(Y)_n8为C。

3.根据权利要求1或2所述的双链核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列的两条单链核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1或2所述的双链核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列的两条单链核苷酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

5.根据权利要求1或2所述的双链核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列的两条单链核苷酸序列分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

6.一种重组质粒，所述重组质粒包含根据权利要求1至5中任一项所述的双链核苷酸序列。

7.根据权利要求5所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pcDNA6.2-EmGFP-PL。

8.根据权利要求5或6所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pcDNA6.2-EmGFP-PL1，序列如SEQ ID NO.7所示。

9.根据权利要求5或6所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pcDNA6.2-EmGFP-PL2，序列如SEQ ID NO.8所示。

10.根据权利要求5或6所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒为pcDNA6.2-EmGFP-PL3，序列如SEQ ID NO.9所示。

11.一种构建根据权利要求6至10中任一项所述的重组质粒的方法，所述方法包括：

1)分别合成如权利要求1至5中任一项所述的双链核苷酸序列的两条单链核苷酸序列，然后使两条单链核苷酸序列退火形成所述双链核苷酸序列；以及

2)将经步骤1)得到的双链核苷酸序列插入到质粒中，以形成所述重组质粒。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述步骤2)包括：

连接经步骤1)得到的双链核苷酸序列与经线性化的质粒，将获得的连接产物转化宿主细胞，然后从宿主细胞获得所述重组质粒。