[发明专利]一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性蛋白

权利要求书

1.一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性蛋白，其特征在于：所述具有清除超氧阴离子活性的蛋白SmP90分子量为90kDa；其N末端氨基酸序列为：Asn-Leu-Asp-Thr-Pro-Tyr-Cys-Phe-Tyr-Ser-Gly-Asp-Tyr-Gly-Gly。

2.按权利要求1所述的从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性的蛋白，其特征在于：所述具有清除超氧阴离子活性的蛋白SmP90的提取方法：将处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液经微孔滤膜过滤，滤液经凝胶色谱柱，采用含NaC l的PBS缓冲液以0.2～0.5mLmin^-1的流速进行纯化分离，收集洗脱体积处于130-150mL的洗脱液，并且洗脱液在2～6℃下用3～5K的超滤管进行浓缩，所得浓缩液即为从沙蜇刺丝囊毒素中分离出的分子量为90kDa；N末端氨基酸序Asn-Leu-Asp-Thr-Pro-Tyr-Cys-Phe-Tyr-Ser-Gly-Asp-Tyr-Gly-Gly的蛋白SmP90。

3.按权利要求1所述的从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性的蛋白，其特征在于：所述处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液为：将沙蜇刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎，破碎后2～6℃离心，收集上清液，并将上清液在冰浴下加入硫酸铵至上清液饱和度为50％，而后放置过夜后离心收集沉淀，沉淀经含NaCl的PBS缓冲液溶解，并离心收集上清液，待用。

4.按权利要求2或3所述的从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性的蛋白，其特征在于：所述含NaCl的PBS缓冲液，缓冲液中NaCl浓度为0.15M，PBS浓度为10～50mM，pH7.0。

5.按权利要求2所述的从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性的蛋白，其特征在于：所述沙蜇刺丝囊细胞为：将置于-80～-20℃低温的沙蜇触手于2～6℃自溶12～48h，自溶后利用20～60目的标准分样筛滤去触手残片，而后在2～6℃下10000～15000g离心5～20min，收集下部沉淀，2～6℃冷冻干燥，待用。

6.按权利要求2所述的从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性的蛋白，其特征在于：所述沙蜇刺丝囊细胞加入pH7.0，浓度10～30mM的2～6℃下预冷PBS缓冲液中，而后将其置于冰浴下用超声波功率为200～400kw下破碎20～60min中，工作/间隙为5s/30s。

7.按权利要求2所述的从沙蜇刺丝囊毒素中分离具有清除超氧阴离子活性的蛋白，其特征在于：所述处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤。