[发明专利]一种高纯度雷莫拉宁单组份的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，涉及药品原料的制备方法，具体地说涉及到一种从发酵培养物中分离纯化雷莫拉宁三种单组份的制备方法。

背景技术

许多临床严重感染的病源菌是革兰氏阳性菌。由于抗生素的大量使用，细菌耐药性问题日趋突出。寻找新的糖肽类抗生素逐渐成为医药行业迫切的需要。目前,已有几种具有很好前途的新型抗生素正处于开发阶段,雷莫拉宁便是其中之一。

雷莫拉宁单组份A1、A2和A3的结构式如下：

组份R分子量A1-CO-CH=CH-CH=CH-CH₂-CH₂-CH₂2540A2-CO-CH=CH-CH=CH-CH₂-CH(CH₃)₂2555A3-CO-CH=CH-CH=CH-CH₂-CH₂-CH(CH₃)₂2568

雷莫拉宁(Ramoplanin、A16686、MDL62198)是一种从游动放线菌(Actinoplanes sp.)培养液中分离出的由17个氨基酸组成的一种新型的糖肽类抗生素,主要抑制革兰氏阳性菌的生长。其纯品是由A1、A2、A3三个组份组成的混合物,其中A2为主要成分,占80%。雷莫拉宁能够特异而迅速地抑制革兰氏阳性菌细胞壁的生物合成。这种抑制作用与万古霉素(Vancomycin)和替考拉宁（Teicoplanin)的抑菌机制不同。体外试验表明,雷莫拉宁对葡萄球菌的抑菌率是万古霉素和替考拉宁的4～8倍,而对链球菌、肠球菌、棒状杆菌、梭菌等多种革兰氏阳性菌都有很强的抑菌活性。另外,雷莫拉宁对许多具有耐药性的病原菌有很好的抑菌效果。雷莫拉宁的细胞毒性较小且无交叉耐药问题。但因其分子量较大,故胃肠道难于吸收，目前雷莫拉宁主要开发为外用药物。雷莫拉宁在治疗痤疮、感染性外伤以及腹泻感染等病症上已取得了良好的效果,并且已进入了临床试验。

美国专利US5491128报道了将雷莫拉宁粗提物溶解后，用硅胶柱吸附。然后依次用不同浓度的酸水和乙腈梯度洗脱，分别得到A2及A3。再用半制备色谱分离，得到A1单组份。该方法存在以下缺点：（1）滤液未经脱色除杂，直接得到粗提物，含杂质较多，对下游纯化介质造成的损伤大；（2）硅胶柱层析用不同浓度的酸水和乙腈梯度洗脱，水会造成硅胶层析能力下降，再生后才能重复使用，无法实现规模化生产。中国专利CN200610024152和美国专利US4427656公开了雷莫拉宁单组份的制备方法，所用的分离介质都是C18反相硅胶。该介质价格昂贵，每升售价达到1万元以上，制备成本很高。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，研究设计一种制备高纯度、低成本的雷莫拉宁单组份的制备工艺。本发明首次采用聚合物微球分离纯化发酵液粗提物，介质的成本是C18反相硅胶的30%，且分离效果相当。以聚合物微球为分离介质，通过梯度解析，有效地去除了发酵代谢过程中产生的杂质，得到高含量的雷莫拉宁A1、A2和A3单组份，含量大于98.0%，总收率大于70%，适于工业化规模生产高纯度雷莫拉宁A1、A2和A3单组份。

下面对本发明进行具体描述：