[发明专利]抗人非小细胞肺癌单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗人非小细胞肺癌单克隆抗体及其应用。

背景技术

肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率占各种恶性肿瘤的首位，已成为严重危害人类健康和生命的主要疾病之一。传统的治疗方法对肺癌的治疗效果均不理想。手术治疗对多发、转移或复发的肺癌患者无能为力，且易复发；化疗对相当数量的患者疗效不佳，并且存在广泛的全身毒副作用；由于受到胸腔重要脏器的限制，放疗的治疗作用也很有限。近年来，靶向抗肿瘤生物治疗逐渐成为肺癌临床治疗的研究热点，因其在提高疗效的同时，还能大幅度降低副作用的发生风险，是提高肺癌疗效的一条重要途径。目前已研制出一些肺癌分子靶向药物，但这些药物对肺癌靶向治疗的临床疗效尚需进一步提高。因此，发现更多有效的治疗靶位和靶向药物对肺癌病人的诊断、治疗都具有重要意义。

肺癌预后差，患者的5年生存率低于15％，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80％～85％。肺癌预后差的主要原因是难以早期发现、早期诊断从而进行早期治疗。肺癌特异性的单克隆抗体不仅可用于肿瘤诊断研究，在肿瘤治疗方面也是当前医药研究的热点。肺癌相关单抗的研究虽有很多[2-3]，但筛选针对人肺癌不同靶点的单抗的研究较少。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述缺陷，提供一株分泌抗人非小细胞肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一目的是提供人非小细胞肺癌的单克隆抗体。

本发明的又一目的是提供该人非小细胞肺癌的单克隆抗体的应用。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一株分泌抗人非小细胞肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株NM001-1，2011年8月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C201172。

由所述的保藏号为CCTCC NO：C201172的杂交瘤细胞株分泌的抗人非小细胞肺癌的单克隆抗体NJ001-1。

所述的保藏号为CCTCC NO：C201172的杂交瘤细胞株在制备治疗人非小细胞肺癌的药物中的应用。

所述的保藏号为CCTCC NO：C201172的杂交瘤细胞株在制备诊断人非小细胞肺癌的检测试剂中的应用。

所述的单克隆抗体NJ001-1在制备治疗人非小细胞肺癌的药物中的应用。

所述的单克隆抗体NJ001-1在制备诊断人非小细胞肺癌的检测试剂中的应用。

有益效果：

本发明以人肺腺癌细胞系SPCA1为免疫原，用杂交瘤技术，筛选到一株能够稳定分泌抗人非小细胞肺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株NM001-1(CCTCC NO：C201172)。该杂交瘤(CCTCC NO：C201172)所分泌的单抗NJ001-1产量多、效价高，对肺腺癌及鳞癌细胞系有特异性反应，与正常肺细胞、健康人PBMC及其他一些常见的肿瘤细胞系(肝癌、乳腺癌及结肠癌)无反应或低反应性。在免疫组化分析中，单抗NJ001-1与31例肺腺癌及24例肺鳞癌组织均呈阳性反应，其中肺腺癌组织染色呈强阳性；与20例肺炎性假瘤组织不反应；16例小细胞肺癌组织中仅2例表现为弱阳性；16例乳腺癌组织中仅3例表现为弱阳性。

本发明采用软琼脂克隆形成实验、裸鼠移植瘤模型研究了单抗NJ001-1在体内、体外实验中对肺腺癌的作用效应，结果表明单抗NJ001-1在体内外对肺腺癌有显著的抑制作用。本发明进一步研究了单抗NJ001-1的抑癌机制，结果表明单抗NJ001-1通过诱导细胞凋亡抑制肿瘤的发生、发展，可较好地直接干预或辅助治疗肺癌。

附图说明

图1、分泌单抗NJ001-1的杂交瘤细胞NM001-1的染色体分析图

图2、间接细胞ELISA法分析单抗NJ001-1与多种肿瘤细胞及非肿瘤细胞的反应性

图3、单抗NJ001-1的间接免疫荧光反应结果图(×400)

蓝色荧光：Hoechst核染结果；绿色荧光：FITC标记二抗染色结果；

A：肺腺癌细胞SPCA1，B：乳腺癌细胞ZR-75-30，C：肝癌细胞HepG2，D：人胚肺成纤维细胞WI-38。

图4、单抗NJ001-1与SPCA1裂解液的Western blot分析

图5、单抗NJ001-1与不同病理组织反应的免疫组化分析(×200)

A：非小细胞肺癌(腺癌)，B：非小细胞肺癌(鳞癌)，C：乳腺癌，D：肺炎性假瘤，E：小细胞肺癌。

图6、SPCA1在软琼脂上形成的克隆(×100)