[发明专利]一株防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌

说明书

技术领域

本发明涉及一株防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌，属于微生物领域。

背景技术

烟草炭疽病是烟草主要病害之一，在烟草各生育期都可以发生，以苗期为害最重。我国各产烟区均有发生，塑料大棚育苗管理不善，消毒不彻底、温湿度不协高，往往在3-4天之内就会发病，造成烟苗生长缓慢甚至大量死亡，造成苗源缺乏，影响后期的烟叶生产。

该病害目前的防治方法主要以化学农药为主， 但长期使用化学农药，易使病菌产生抗药性，危害更加猖獗；同时也会造成烟叶农药残留的增加和污染环境等问题，因此与环境相容的生物农药研制与开发应用，是缓解和改变化学农药所导致“三R”(Residue，Resistance，Resurgence)问题的有利措施，是促进烟草行业可持续健康发展的重要手段。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是提供一株无公害且对烟草炭疽病具有显著防效的枯草芽孢杆菌。

本发明要解决的第二个技术问题是提供一种防治烟草炭疽病的菌剂。

本发明要解决的第三个技术问题是提供一种防治烟草炭疽病菌剂的制备方法。

本发明要解决的第四个技术问题是提供一种防治烟草炭疽病的枯草芽孢杆菌及其菌剂的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），命名为MKT-01，经鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种（Bacillus subtilis subsp. subtilis），是从烟草根际分离得到，已于2011年7月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），其保藏编号为 CGMCC No.5082。

本发明还提供一种由保藏编号为CGMCC No.5082的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）MKT-01制备的菌剂。该菌剂的优选使用浓度为18.0×10⁸cfu/mL。该菌剂可以通过现有技术中的制备方法来制备，还可以根据需要，添加可接受的辅料，制成各种类型的菌剂。

为了更加详细地说明本发明所述菌剂的制备，本发明提供了一种所述枯草芽孢杆菌菌剂的优选的制备方法，该方法包括以下步骤：

（1）菌种活化：将保藏号为CGMCC No.5082的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）MKT-01接种于斜面培养基上，于26℃~28℃条件下培养2~3天；

（2）种子培养：从斜面培养基上挑取单菌落接入种子培养基中，于26℃~28℃条件下培养18~24小时，制得种子液；

（3）发酵培养：按4~5%的接菌量，将所述种子液接入发酵培养基中，于26℃~28℃条件下培养2~3天，即得所述的枯草芽孢杆菌的菌剂。

上述方法中涉及的各种培养基均可以是现有技术中适于枯草芽孢杆菌生长的培养基。本发明也提供一种优选的培养基配方，即：

所述斜面培养基组分及配比为：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10 g，琼脂20 g，加水定容至1000 mL，pH为7.0~7.5，121 ℃下高温蒸汽灭菌30 min。

所述种子培养基和发酵培养基组分及配比为：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10 g，加水定容至1000 mL，pH为7.0~7.5，121 ℃下高温蒸汽灭菌30 min。

本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌MKT-01或所述菌剂在制备防治烟草炭疽病药物中的应用。

本发明的优点是：

经过试验证明，本发明所述的枯草芽孢杆菌MKT-01对烟草炭疽病的防治效果高达79.22%，显著高于目前防治烟草炭疽病的当家生物农药多抗霉素，与化学农药代森锰锌杀菌剂的防治效果持平，因此MKT-01的推广应用有望代替化学农药防治烟草炭疽病，保护了环境、降低了农残，提高了烟叶安全性，具有良好的生物农药开发前景。

附图说明

图1为本发明菌株MKT-01的电镜照片，杆状，周生鞭毛；

图2本发明菌株MKT-01对烟草炭疽病的室内抑菌照片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但并不是限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂供应商购买得到。

实施例1 枯草芽孢杆菌MKT-01获得与鉴定