[发明专利]焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的方法

权利要求书

1.一种焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌异烟肼耐药性的方法，其特征在于，包括以下顺序步骤：

步骤1，对KatG基因进行PCR扩增；

步骤2，对PCR扩增产物进行焦磷酸测序，判断KatG基因是否具有突变位点；其中焦磷酸测序采用SNP模式、核苷酸加样顺序为GTCACAGTCTG。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，针对KatG基因315位点进行焦磷酸测序并设计引物。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对KatG基因进行PCR扩增进行两次PCR扩增，其中第一次扩增以痰标本结核杆菌DNA提取物为模板，第二次扩增以第一次扩增PCR产物为模板。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第一次扩增使用的第一PCR引物具有SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示序列，所述第二次扩增使用的第二PCR引物具有SEQ ID NO.3所示序列或带有生物素标记的具有SEQ ID NO.2所示序列。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一PCR引物和第二PCR引物的浓度为0.4 μml/L。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在焦磷酸测序中用的测序引物具有SEQ ID NO.4所示序列。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增反应过程包括下列顺序步骤：

步骤1：在94℃下进行预热5分钟；

步骤2：在95℃下保持30秒进行变性、61℃下保持30秒进行退火、72℃下保持30秒进行扩增和延伸，循环退火过程40次；

步骤3：在72℃下保持10分钟。