[发明专利]一种生物免疫传感器及其检测方法

权利要求书

1.一种生物免疫传感器，其特征在于所述的生物免疫传感器将生物学免疫技术和纳米技术完美有机结合,利用抗体和抗原之间特异性的免疫化学反应原理来实现食品中致病菌电信号检测的新型传感技术。

2.一种如权利要求1所述的生物免疫传感器的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）称取5g CNT，加入55-65mL, 2.0mol/L的HCl，超声处理3.5-4.5h，用微孔滤膜过滤，然后采用双蒸水反复洗涤至中性，95-105^oC下干燥成粉末待用，采用硝酸回流法对MWCNT进行羧基化处理，具体方法为：将3g MWCNTs至于在4M的硝酸中，然后在加热搅拌的条件下冷凝回流24h，回流结束后用孔径为0.2微米的微孔滤膜过滤，并用二次水反复洗涤，至其PH值为中性为止，所得产物于真空干燥箱中在55-65^oC下干燥15-20h待用，将羧化的CNT在石英研钵中研磨成粉末，称取1.0g于l00℃干燥50-70min，去除物理吸附水，冷却后，加入到100mL二氯甲烷中，超声9-11min，之后，再加入 0.5g APTMS，于氮气环境下搅拌回流反应过夜，然后，过滤出固体物质后，分别用二硫化碳、四氢吠喃和乙醇洗涤三次，以除去多余的有机物，再将制得的沉淀物质在58-62℃真空环境下干燥3.5-4.5h，得黑色的巯基修饰的碳纳米管(MWCNT-SH)备用；

（2）金纳米颗粒的制备采用柠檬酸钠还原氯金酸法实现，在洁净的三口烧瓶中加入90-110 mL 质量分数为0.01%的氯金酸溶液，在冷凝回流条件下加热至沸腾，快速加入2.5-3.5mL 质量分数为1%柠檬酸钠溶液，30min后停止加热，然后采用一次性离心管对产物进行离心14-16min，控制离心管的转速12000 rpm，洗涤一次；

（3）量取100ml粒径为15nm的金溶胶于反应器中，并搅拌，随后称取MWCNT-SH 0.1g加入，常温搅拌反应3.5-4.5h，之后离心、洗涤，再经真空常温干燥，称量，备用；

（4）称取0.01mg Au-MWCNT杂合材料，加入1ml水中，超声50-70min,取1μl悬浊液滴于20μM 间距的梳状电极表面，室温下干燥，然后置于管式炉中在280-320℃、高纯Ar气保护条件下烧结25-35min，制备好的Au-MWCNT修饰的电极在固定电压1V的条件下测量其电流信号；

（5）把电极置于1×PBS稀释10倍的免疫血清溶液中吸附抗体，过夜，把电极取出，用双蒸水轻轻漂洗3-4次；

（6）用1%的牛血清白蛋白和1%的Tween 20作为封闭液，封闭免疫血清修饰的电极2-3h，于室温下干燥，制备得到免疫电极，然后测电流信号；

（7）把制备好的免疫电极置于5ng/ml的抗原蛋白溶液中培育过夜，然后取出用双蒸水轻轻漂洗3-4次，于室温下干燥，再次测量抗体抗原反应后的电流信号，即实现了抗原的检测。

3.根据权利要求1所述的生物免疫传感器，其特征在于：所述的生物免疫传感器可以检测副溶血弧菌、沙门氏菌、李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌食品致病微生物。