[发明专利]利拉鲁肽的固相合成方法

权利要求书

1.一种利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：包括如下步骤：

A）在活化剂系统的存在下，由树脂固相载体和N端Fmoc保护的甘氨酸（Fmoc-Gly-OH）偶联得到Fmoc-Gly-树脂；

B）通过固相合成法，按照利拉鲁肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸采用Fmoc-Lys(Alloc)-OH；

C）脱除赖氨酸侧链保护基Alloc；

D）通过固相合成法，在赖氨酸侧链偶联Palmitoyl-Glu-OtBu；

E）裂解，脱除保护基和树脂得到利拉鲁肽粗肽；

F）纯化，冻干，得到利拉鲁肽。

2.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述步骤A）中，所述树脂固相载体采用2-CTC树脂，所述活化剂系统选自DIEA、TMP或NMM，所述Fmoc-Gly-树脂为0.15~0.28 mmol/g替代度的Fmoc-Gly-CTC树脂。

3.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述步骤A）中，所述树脂固相载体采用王树脂，所述活化剂系统由DIC、HOBt和DMAP组成，所述Fmoc-Gly-树脂为0.12~0.24 mmol/g替代度的Fmoc-Gly-王树脂。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述步骤B）包括如下步骤：

B1）采用DBLK使所述Fmoc-Gly-树脂脱除Fmoc保护基，得到H-Gly-树脂，所述DBLK由体积比为1：4的哌啶和DMF组成；

B2）在偶联剂系统的存在下，H-Gly-树脂和Fmoc保护且侧链保护的精氨酸偶联得到Fmoc-Arg(Pbf)-Gly-树脂；

B3）重复步骤B1、B2，按照利拉鲁肽主链肽序依次进行氨基酸的偶联。

5.根据权利要求4所述的利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOAt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的任意组合。

6.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述步骤C）中，脱除赖氨酸侧链保护基Alloc采用0.1~0.4倍合成规模用量的Pd(PPh₃)₄和10~30倍合成规模用量的苯基硅烷在固相条件下脱除10~65 分钟。

7.根据权利要求1所述的利拉鲁肽的固相合成方法，其特征在于：所述步骤F）中，纯化为反相高效液相色谱纯化，色谱柱为反相C8柱，柱温为40~50℃。