[发明专利]检测莱克多巴胺的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学发光检测试剂盒及其测试方法，特别是检测饲料、组织、尿液等样本中莱克多巴胺残留量的磁颗粒化学发光检测试剂盒。 

技术背景

莱克多巴胺(Ractopamin)属于β-兴奋剂。β-兴奋剂是营养重分配剂的一种，是一类结构和功能类似肾上腺素而后去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生物，它能改善脂肪型动物的肉与脂肪的比例，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率，并能加速动物生长，而被添加于动物饲料中。常见的β2-兴奋剂有克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇等。随着我国对克伦特罗的监管力度的加大，克伦特罗的使用逐渐减少，其他β2-兴奋剂的使用逐渐增加。由于莱克多巴胺有类似于克伦特罗的作用，在动物组织中残留，从而对人体产生不利影响，所以我国禁止莱克多巴胺其作为饲料添加剂使用。 

在莱克多巴胺的检测方面，目前最常用的方法包括高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、液相色谱-质谱联用(LC-MS)、酶联免疫吸附法(ELISA)等方法，仪器方法操作繁琐、耗时长、检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理方法复杂，仪器本身的价格也比较昂贵，不利于推广应用，酶联免疫吸附法是基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度高，特异性较好，技术操作简单，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用，但是ELISA方法存在一些缺陷，如非均相反应，需要多步洗板过程，难以提高操作的自动化程度，酶催化反应，对温度的 要求较高，试剂盒的稳定性较差。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测莱克多巴胺的磁颗粒化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行莱克多巴胺的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且反应速度较快。 

本发明的另一个目的在于提供一种莱克多巴胺的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。 

实现上述目的，本发明提供一种莱克多巴胺检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。 

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。 

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。 

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的莱克多巴胺半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。 

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。 

所述的荧光素标记物是FITC标记莱克多巴胺单克隆抗体。 

本发明还提供一种利用试剂盒检测莱克多巴胺的方法，包括下列步骤： 

1)分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min； 

2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后在37℃温育5min； 

3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500μl冲洗复合物沉淀； 

4)上述清洗步骤重复2-4次； 

5)4)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物1和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算莱克多巴胺的浓度。 

所述的发光底物的主要成分是NaOH和H₂O₂。 

本发明中分析测试方法所用的分析仪是：包括电源电路、自动注射泵1和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是CI-2008系统。 

本发明所述的分离试剂是包被羊抗FITC单克隆抗体，其表面基团的含量是0.1-0.3eqm/g，其保存于pH7.1-7.5，含有0.1-0.5％牛血清白蛋白，0.2-0.4％吐温-20，0.2-0.3％叠氮化钠，0.1-0.2mol/L磷酸盐缓冲液中。所述的FITC是异硫氰酸荧光素。所述百分含量为质量百分含量。