[发明专利]由一种位置异构体表示的稳定的干扰素α聚乙二醇缀合物

说明书

技术领域

本发明涉及药物，即涉及干扰素的生理活性缀合物，特别涉及干扰素与聚乙二醇(PEG)的新颖缀合物，其可用于医药，例如用于治疗病毒、免疫和肿瘤疾病。 

背景技术

干扰素(IFN)是一组生物活性蛋白质或糖蛋白，其由多种细胞对病毒感染应答而生产，或者因某种化学和生物物质对细胞的影响而产生(Isaacs & Lindeman，1957；Pestka等人，2007)。IFN与细胞受体的缀合导致多种介导抗病毒、免疫调节和抗增殖IFN效应的细胞内蛋白的诱导(Pestka等人，2004；Bekisz，2004)。 

不同的人类IFN基因被克隆并在细菌和动物细胞中表达，因此已产生多种重组IFN(Pestka等人，2004；Pestka，2007)。包含重组IFN的药物用于临床实践以治疗多种病毒、肿瘤和免疫疾病(Pestka等人，2004；Chevaliez & Pawlotsky，2009)。 

目前，基于干扰素的药物用于临床实践以治疗多种病毒、肿瘤和免疫疾病(Pestka等人，2004)。IFN药物最广泛地用于治疗病毒性肝炎(Chevaliez & Pawlotsky，2009)，该病是最严重的社会问题之一。如今全世界约有3.5亿病人被乙型肝炎病毒慢性感染，并有1.7亿病人被丙型肝炎慢性感染(Marcellin，2009)。丙型肝炎在大多数情况下呈现慢性病程，其导致严重后果—肝硬化和肝细胞癌(Modi & Liang，2008)。根据世界卫生组织报告，从1961年起慢性肝炎和肝硬化作为美国和西欧国家中的死因从第10位提高到第5位(Marcellin，2009)。 

包含IFN的药物普遍用于治疗白血病和实体瘤，包括复发性黑色素瘤(Bukowski等人，2002；Decantris等人，2002；Qintas-Cardama等人，2006)。 

包含天然IFN的药物的效力受皮下组织快速吸收、大体积分布、相对低的稳定性、短半衰期、高免疫原性和毒性的限制(Wills，1990)。因此，施用之后几小时内，观察到血浆中IFN浓度快速下降，且注射24小时后血浆中已不能检测到干扰素(Chatelut等人，1999)。干扰素浓度的快速下降导致病毒复制 继续和病毒颗粒浓度升高(Lam等人，1997)。因此，需要经常注射干扰素以达到血浆中的有效治疗浓度，导致剂量依赖的副作用。因此使用IFN-α2b的慢性丙型肝炎(CHC)的单一疗法在12个月中仅在15-20％的病人中引起持续的病毒学应答，而在具有基因型Ib和高病毒负载的病人中完全没有观察到药物效力(McHutchinson等人，1998)。 

当使用持续释放药物特别是PEG化IFN时，IFN的治疗效力可得到增强(Manns等人，2001；Hadziyannis等人，2004；Zeuzem等人，2001)。PEG化IFN由干扰素分子与聚合物化学缀合产生，所述聚合物例如由环氧乙烷的重复残基组成的单甲氧基聚乙二醇(MPEG)，其在一端具有甲氧基，在另一端具有羟基。MPEG分子可具有不同的分子量和立体化学结构(线型或分枝型)。对于PEG化反应，MPEG末端的羟基由多种反应功能基团活化。活化的MPEG可在一个或多个位置共价缀合蛋白质，取决于活化基团的性质和反应条件(Zalipsky & Hurris，1997；Roberts等人，2002)。 

IFN的PEG化导致更好的药代动力学、延长的半衰期、减少的血液浓度波动、降低的免疫原性和毒性、升高的体内活性(体外活性降低)；提高的稳定性(Glue等人，2000；Reddy等人，2001)。 

体外系统中的降低活性取决于PEG分子量。缀合分子量≤5000Da的小PEG分子引起体外活性的微小变化(Grace等人，2005)。包含如此质量PEG的PEG化蛋白与未修饰蛋白的药效和药代动力学性质难以区分。缀合更高分子量的PEG由于无效缀合受体导致体外生物学活性的显著降低，但在此情况下可见PEG化蛋白的药代动力学和药效性质明显提高(Delgado等人，1992)，导致体内生物学活性升高(Bailon & Berthold，1998)。PEG结构也影响生物学活性和药代动力学性质，缀合线型PEG比缀合分枝型PEG结构具有更大的分布体积(Caliceti等人，2003)。