[发明专利]长效重组人生长激素的Fc融合蛋白

权利要求书

1.一种重组hGH-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白从N端到C端依次含有人GH、肽接头和人IgG Fc变体，

并且所述的人IgG Fc变体选自下组：

(i)含有Pro331Ser突变的人IgG2绞链区、CH2和CH3区域；

(ii)含有Ser228Pro和Leu235Ala突变的人IgG4绞链区、CH2和CH3区域；

(iii)含有Leu234Val、Leu235Ala和Pro331Ser突变的人IgG1绞链区、CH2和CH3区域。

2.如权利要求1所述的重组hGH-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述的肽接头含有2-20个氨基酸，所述肽接头存在于人GH和人IgG Fc变体之间；且所述的肽接头含有两个或更多选自甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸和苏氨酸的氨基酸。

3.如权利要求1所述的重组hGH-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：18、20或22所示。

4.如权利要求1所述的重组hGH-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列是去除了-26到-1位氨基酸残基的hGH前导肽之后的SEQ ID NO：18、20或22所示的氨基酸序列。

5.如权利要求1所述的重组hGH-L-vFc融合蛋白，其特征在于，所述的hGH-L-vFc融合蛋白在摩尔基础上，具有与rhGH类似或更高的体外生物活性、更长的半衰期。

6.一种编码权利要求1所述的重组hGH-L-vFc融合蛋白的DNA分子。

7.一种CHO衍生细胞株，其特征在于，所述细胞在其生长培养基中在每24小时内，产生超过10μg/百万个细胞的如权利要求1-5任一所述的重组hGH-L-vFc融合蛋白。

8.如权利要求7所述的CHO衍生细胞株，其特征在于，在生长培养基中，每24小时内，产生超过30μg/百万个细胞的如权利要求1-5任一所述的重组hGH-L-vFc融合蛋白。

9.如权利要求7所述的CHO衍生的细胞株，其特征在于，它含有编码hGH-L-vFc融合蛋白的DNA序列，并且所述的DNA序列具有SEQ ID NO：17、19或21所示的核苷酸序列。

10.一种制备权利要求1所述重组融合蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在融合蛋白在其生长培养基中每24小时期间内，表达超过10μg/10⁶(百万)个细胞的条件下，培养权利要求7所述的细胞株；和

(b)纯化步骤(a)表达的蛋白质，其中重组融合蛋白在摩尔基础上，具有与rhGH类似的或更高的体外生物活性，更长的半衰期。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，在于人GH和人IgG Fc变体之间有2-20个氨基酸的柔性肽；且所述柔性肽接头含有两个或更多选自甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸和苏氨酸的氨基酸。

12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：18、20或22所示。

13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的融合蛋白的氨基酸序列是去除了-26到-1位氨基酸残基的hGH前导肽之后的SEQ ID NO：18、20或22所示的氨基酸序列。