[发明专利]一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法

权利要求书

1.一种体外酶反应生成的类胡萝卜素的快速提取方法，步骤如下：

(1)将表达类胡萝卜素代谢相关酶的重组大肠杆菌菌体超声波破壁，制得类胡萝卜素代谢相关酶粗酶液；

(2)向步骤(1)制得的类胡萝卜素代谢相关酶粗酶液中加入相应的反应物质，反应体系用缓冲液定容后，超声波混匀，30℃避光密闭振荡反应1小时，得混合液；

(3)向步骤(2)制得的混合液中加入1/15～1/10体积2mol/L NaOH和1/15～1/10体积10％SDS溶液，混合均匀；再加入混合液1/2体积3mol/L NaAc溶液，振荡5～10秒，离心，弃上清液，得蛋白质沉淀；

(4)向步骤(3)制得的蛋白质沉淀中加入丙酮，搅拌1～2分钟，使沉淀均匀分散，得到含类胡萝卜素产物的丙酮溶液；

(5)将步骤(4)制得的含类胡萝卜素产物的丙酮溶液经离心后，取上清液，滤膜过滤后，经检测，即得类胡萝卜素的丙酮溶液。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声波破壁的条件为：22kHz，150W，30分钟。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中类胡萝卜素代谢相关酶为八氢番茄红素脱氢酶、羟基链孢红素合成酶、羟甲基链孢红素合成酶、球形烯加氧酶、番茄红素环化酶之一。

4.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，八氢番茄红素脱氢酶的反应物质为八氢番茄红素和其他除氧反应物、羟基链孢红素合成酶的反应物质为链孢红素、羟甲基链孢红素合成酶的反应物质为羟基链孢红素和其他除氧反应物、球形烯加氧酶的反应物质为球形烯、番茄红素环化酶的反应物质为番茄红素和其他除氧反应物。

优选的，上述八氢番茄红素、链孢红素、羟基链孢红素、球形烯或番茄红素的反应浓度为10μmol/L。

5.如权利要求4所述的提取方法，其特征在于，上述其他除氧反应物为葡萄糖、葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，葡萄糖的反应浓度为2mmol/L，葡萄糖氧化酶的反应浓度为20U/mL，过氧化氢酶的反应浓度为20000U/mL。

6.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中超声波混匀条件为：22kHz，50～150W，10～60秒。

7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中离心条件为：12000rpm离心1分钟。类胡萝卜素随蛋白质共沉淀。

8.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中离心条件为：12000rpm离心1分钟。

9.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中的检测采用HPLC进行产物检测，色谱柱为美国Agilent公司出售的TC-C18，流动相甲醇/乙腈(体积比为4/6)，流速1mL/分钟，柱温30℃，检测波长474nm。

10.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中的滤膜为22μm滤膜。