[发明专利]一种基于量子点的免疫荧光检测己烯雌酚的方法及专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于量子点的免疫荧光检测己烯雌酚的方法及专用试剂盒。

背景技术

己烯雌酚(Diethylbestrol，DES)是一种人工合成的非甾体类雌激素，因其能促进蛋白合成，加快增重和骨骼钙化，并减少饲料消耗，被作为动物促生长剂应用于畜禽生产和水产养殖等方面。但许多科学试验证实了己烯雌酚是一种致癌物质，对人和动物的健康危害较大，因此，许多国家包括我国已规定在畜禽及水产养殖中禁用己烯雌酚。目前，用于己烯雌酚残留物定量检测的金标准是色谱/质谱法，但其样品前处理过程繁琐费时，检测费用高。基于竞争性酶联免疫反应原理的ELISA方法不需进行复杂的样品前处理过程，检测时间相对短，但其精度不够，只能用于定性筛查，无法用于定量确证。当前畜产品和水产品中检测己烯雌酚残留及其污染状况调查的样品数量大，任务重，花费高，检测周期过长。因此，急需检测结果稳定、快速、经济的标准方法。

量子点(Quantum Dots，QDs)标记材料是近年来发展起来的一类新型材料，包括II-VI族和III-V族半导体纳米晶。由于量子点突出的发光和吸收特性，使其具有荧光寿命长、宽激发光谱、窄发射光谱、可精确调谐的发射波长、很高的光化学稳定性、可进行多色标记等优越特性，采用其作为标记材料，可实现对靶标分子的超微量检测。

由于适用于免疫诊断试剂的量子点标记材料必须满足量子产率高、荧光强、生物相容性好、高度稳定及成本低等要求，而现行国外商业化的量子点其量子产率多在40％以下，其尺寸偏小，需要用激光光学仪器来照射激发，目前仅能应用在细胞免疫荧光检测和流式细胞检测和分选等方面，因此国际市场上还没有量子点免疫检测试剂问世。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于检测己烯雌酚的免疫荧光检测试剂盒。

本发明所提供的用于检测己烯雌酚的免疫荧光检测试剂盒，包括己烯雌酚包被原和量子点标记的己烯雌酚抗体。

上述试剂盒中，所述己烯雌酚抗体为抗体效价为10⁶以上(具体为10⁶)、抗体亲和常数为10⁶～10⁸M^-1或10⁷～10⁸M^-1或10⁸M^-1的己烯雌酚单克隆抗体；具体为抗体效价为10⁶、抗体亲和常数为10⁸M^-1的己烯雌酚单克隆抗体，所述己烯雌酚单克隆抗体购自广州市江森生物科技有限公司，产品目录号为JS-23-0004。

所述量子点为表面羧基含量为1×10^-3～9×10^-3mmol/mg或1×10^-3～6×10^-3mmol/mg或5×10^-3mmol/mg的水溶性CdSe/ZnS核壳结构的量子点；所述量子点的量子产率为40～70％或50～70％或60％；所述量子点的激发光波长为345nm，发射波长是620nm。

上述任一所述试剂盒中，所述量子点的粒径为10～20nm，所述粒径具体为13～20nm，所述粒径尤其优选为20nm；其粒径的偏差(CV)在10～30％之间，具体为10～20％之间，再具体为15％；

上述任一所述试剂盒中，所述量子点标记的己烯雌酚抗体中，所述量子点上的羧基与所述己烯雌酚抗体上的氨基形成肽键，进而使所述量子点与所述己烯雌酚抗体连接。

上述任一所述试剂盒中，所述己烯雌酚包被原为己烯雌酚与载体蛋白的偶联物，其中所述己烯雌酚与所述载体蛋白通过向己烯雌酚中引入的羧基与载体蛋白中的氨基形成的肽键而连接；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、人血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、甲状腺球蛋白、兔血清白蛋白、卵清蛋白、纤维蛋白原和兔和鸡的丙种球蛋白中的任一种。

上述任一所述试剂盒中，所述试剂盒中还包括己烯雌酚标准品、稀释液、洗涤液、含有孔的聚苯乙烯板、包被缓冲液和封闭液；

所述己烯雌酚标准品为(E)-4，4′-(1，2-二乙基-1，2-亚乙烯基)双苯酚；

所述稀释液为PBS缓冲液；具体为0.02M、pH7.4的PBS缓冲液。

所述洗涤液为PBST缓冲液；具体按照如下方法制备：取0.2ml Tween20及0.1g的NaN3溶于所述稀释液中，溶解后用稀释液定容至1L。