[发明专利]用于重型肝炎肝衰竭早期预警和诊断试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测试剂，特别是一种用于重型肝炎肝衰竭早期预警和诊断 试剂盒及其制备方法。

背景技术

肝脏是人体最大的内脏器官，也是功能最复杂的器官之一，它担负着许多非 常重要的生理功能，如各种物质代谢的中枢、分泌胆汁、合成蛋白和凝血因子、 解毒等功能，对维持生命和内环境的稳定起重要的作用。目前，终末期肝病，如 重型肝炎肝衰竭、肝硬化和肝癌等均危及生命，且死亡率极高，一直是世界医学 界难以解决的问题。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过乙肝，其中3.5 亿人为慢性乙肝感染者，每年约有100万人死于乙肝感染所致的肝衰竭、肝硬化 及原发性肝细胞癌。因此，重型肝炎肝衰竭早期预警和早期诊断需求尤为迫切。

CXCL10是1985年由Luster等首次发现报道的，是利用分子生物学技术从 活化U937细胞株的基因表达产物中筛选出来的，其相关蛋白被命名为CXCL10， 又名IFN-γ诱导蛋白10(IFN-γ-inducibleprotein 10，IP-10)。人类CXCL10基因定 位于染色体4q21，含有3个内含子和4个外显子，共98个氨基酸残基，相对分子 质量约为10000。CXCL10属于趋化因子CXC家族，氨基酸的同源性为20％-70％， 其N末端含有4个保守的半胱氨酸(Cys)残基，此区域为受体活化的重要区域。 由于分子中第一个半胱氨酸前没有ELR(Glu-Leu-Arg序列)构型而将CXCL10 归入非ELR-CXC趋化因子。CXCL10主要由单核细胞、内皮细胞、肝实质细胞、 树突状细胞(DC)、NK细胞、成纤维细胞等产生。CXCL10在胸腺、脾和淋巴 结的基质中呈现组成性低水平表达，

对T细胞、B细胞、单核巨噬细胞、DC、NK细胞、嗜碱性粒细胞等显示有较强 的趋化和功能活化作用，促进适应性免疫反应的形成及炎症发生。此外，CXCL10 也可在血管生成、造血作用、淋巴器官形成、伤口愈合及胚胎发育的调节中发挥 作用。

CXCL10的特殊作用由其特异性受体CXCR3介导。该受体为CXCL10的唯 一受体，其基因定位于染色体Xp13，cDNA全长1104bp，编码368个氨基酸， 相对分子质量约为41kDa。CXCR3是由7个跨膜亚单位组成的膜结合分子，属 于G蛋白偶联受体超家族。CXCR3主要表达于活化的T细胞、NK细胞表面， 其配体主要有CXCL10、IFN-γ诱导的单核因子(Mig，CXCL9)和T细胞α趋化 因子(I-TAC，CXCL11)。

CXCL10与靶细胞上的相应受体CXCR3的胞外N端结合，介导受体蛋白胞 内C端丝氨酸/苏氨酸磷酸化，通过一系列跨膜信号转导通路，使CXCR3阳性靶 细胞向炎症病灶迁移、活化，在许多疾病的发生发展中发挥重要作用。 CXC趋化因子配体10(CXC chemokine ligand-10，CXCL10)是新近发现的一种 重要的趋化因子，属于CXC类非ELR亚族。CXCL10主要介导Th型炎症反 应，趋化T淋巴细胞和单核细胞，与炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等有关。 近年研究发现，CXCL10在不同类型肝病中表达升高，并且与疾病的发生、发展、 治疗和预后等密切相关。但并未有报道解释CXCL10与重型肝炎肝衰竭直接的关 系。

发明内容

本发明根据上述领域的空白，提供一种用于重型肝炎肝衰竭早期预警和诊断 试剂盒及其制备方法，本发明的试剂盒能够对重型肝炎及肝衰竭提供早期预警和 诊断，为医生和患者提供充裕的时间采取合理的预防和治疗措施。

用于重型肝炎肝衰竭早期预警和诊断试剂盒，包括包被有抗CXCL10单克隆 抗体的酶标板。

所述酶标板为化学发光酶标板，所述抗CXCL10单克隆抗体的包被浓度为 2ug/ml。

所述试剂盒还包括辣根过氧化酶标记的羊抗人CXCL10抗体、CXCL10蛋白 标准品、样品稀释液、化学发光底物液和洗涤液。

所述化学发光底物指化学发光底物液A：3.0mmol/L鲁米诺与0.3mmol/L对碘 苯酚的混合液，和化学发光底物液B：7.5mrnol/L的双氧水。

所述样品稀释液的配方为：山羊血清100ml，1％(W/W)硫柳汞20ml，0.1M铁 氰化钾10ml吐温-20 0.5ml，10mg/ml庆大霉素10ml，加0.01M PBS(PH7.4)至 1000ml：