[发明专利]低分子水产胶原蛋白肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白肽提取技术领域，具体涉及一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法。

背景技术

胶原蛋白是人体内含量最多、分布最广的蛋白质，是结缔组织的主要蛋白质成分，约占机体总蛋白的25％，它主要分布在动物的皮肤，骨，软骨，角膜，血管内壁等组织内。动物的结缔组织中提取的胶原蛋白，因具有特殊的蛋白质结构和身体亲和性，广泛应用于食品，化妆品和医疗等与人体健康相关的行业。目前工业生产中使用的胶原蛋白主要是I型胶原蛋白，它是由3条1000个氨基酸肽链组成的高分子硬蛋白，人们直接食用高分子胶原蛋白很难消化吸收，将胶原水解为小分子肽，消化吸收率就会大大提高。另外，近年来人们发现，经蛋白质水解反应获得的小分子胶原蛋白肽具有美容护肤、抗高血压、胃粘膜保护、预防和抑制关节炎、骨质疏松症等诸多生理功能。低分子胶原蛋白的制备可采用物理、化学或生物学方法，由于采用单一方法水解胶原蛋白效果并不理想，所以常采用两种或两种以上并用的方法。但，采用强酸、强碱等化学方法水解胶原蛋白时，水解反应难以调控，难以获得分子量较均一的胶原蛋白肽。另外大量使用化学物质，影响食品安全性的同时造成严重的环境污染；物理方法由于水解效果不如化学法和生物法，所以一般作为生物水解法的辅助方法来使用；利用工业酶水解胶原蛋白的生物学水解方法，由于效率高、容易控制反应、具有酶解特异性等特点广泛应用于工业化生产中。但使用一种酶水解胶原蛋白，很难获得低分子胶原蛋白，所以使用复合酶酶解胶原蛋白是制备低分子胶原蛋白的有效途径。虽然目前有利用复合酶酶解胶原蛋白获得低分子胶原肽的报导，但常用的复合酶法酶解胶原蛋白获得的低分子胶原蛋白肽，出现分子量分布不集中或低分子胶原蛋白肽中氨基酸含量过高的现象。结果为了获得均一的低分子组分，增加低孔径超滤膜或色谱分离等分离设备，导致生产成本提高，得率下降的现象。

发明内容

本发明的目的是提供一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法，不仅可从鱼鳞中获得高含量低分子组分胶原蛋白肽，而且去除影响胶原蛋白产品外观的色素类物质，减轻胶原蛋白特有的鱼腥鱼臭味，提高了鱼类胶原蛋白产品的产品价值。

本发明所采用的技术方案是，一种低分子水产胶原蛋白肽的制备方法，按以下步骤进行：

步骤1，鱼鳞脱灰：

选取干鱼鳞，清洗，在常温条件下，用浓度为4％-35％的盐酸浸泡搅拌10～50min，进行脱灰，然后用蒸馏水反复清洗，除去鱼鳞表面附着的盐酸、磷和钙，得到脱灰的鱼鳞；

步骤2，利用热水浸提制备水溶性胶原蛋白：

取蒸馏水反复清洗脱灰的鱼鳞，当清洗液的pH值为6.2～7.0时停止清洗；将鱼鳞沥干水分，用当量浓度为0.1N的氢氧化钠溶液对鱼鳞脱脂8～24h，然后取蒸馏水反复清洗鱼鳞，当清洗液的pH值为7.0～8.0停止清洗；将清洗后的鱼鳞放入蒸馏水中，控制脱灰、脱脂后的鱼鳞与蒸馏水的重量比为1∶5～8，然后在90℃～125℃温度下热水浸提1～3h，过滤，回收滤液，滤液为水溶性胶原蛋白；

步骤3，制备碱性酶酶解蛋白肽溶液：

分别取氢氧化钠溶液和碱性蛋白酶，将氢氧化钠溶液加入步骤2得到的水溶性胶原蛋白溶液中，调节该水溶性胶原蛋白溶液的pH值为9～11，再往水溶性胶原蛋白溶液中加入碱性蛋白酶，控制溶液中碱性蛋白酶的基质比为0.5％～2％，并在30～60℃的温度下，搅拌酶解8～48小时，接着在98℃～115℃温度下加热10分钟～15分钟，使碱性蛋白酶失去活性，制得碱性酶酶解蛋白肽溶液；

步骤4，制备中性酶酶解蛋白肽溶液：

分别取盐酸溶液和中性蛋白酶，将盐酸溶液加入步骤3得到的碱性酶酶解蛋白肽溶液中，调节该蛋白肽溶液的pH值为6.5～8，再往该蛋白肽溶液中加入中性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中的中性蛋白酶的基质比为0.5％～2％，并在40～55℃的温度下，搅拌酶解8～48小时，接着在98℃～115℃温度下加热10分钟～15分钟，使中性蛋白酶失去活性，制得中性酶酶解蛋白肽溶液；

步骤5，制备酸性酶酶解蛋白肽溶液：

分别取盐酸溶液和酸性蛋白酶，将盐酸溶液加入步骤4得到的中性酶酶解蛋白肽溶液中，调节该蛋白肽溶液的pH值为2.5～5.0；再往该蛋白肽溶液中加入酸性蛋白酶，控制蛋白肽溶液中酸性蛋白酶的基质比为0.5％～2％，并在30～55℃的温度下搅拌酶解8～48小时，接着在98℃～115℃温度下加热10分钟～15分钟，使酸性蛋白酶失去活性，制得酸性酶酶解蛋白肽溶液；

步骤6，活性炭过滤进行脱色、脱腥：