[发明专利]提高水稻钾离子外排逆向转运的方法

权利要求书

1.一种调节水稻钾离子外排逆向转运蛋白，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1中第1-3465位所示。

2.一种根据权利要求1所述的调节水稻钾离子外排逆向转运蛋白，其特征是，该宿主细胞为真核细胞，具体来自水稻。

3.一种具有钾离子外排逆向转运蛋白活性的多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

4.一种根据权利要求1所述蛋白的突变方法，其特征在于，通过利用γ射线对粳稻9522品系进行处理，种植后在F2代挑选叶脉变白的突变体，获得水稻钾离子外排逆向转运蛋白。

5.根据权利要求4所述的突变方法，其特征是，通过突变获得钾离子外排逆向转运的突变体。

6.一种基于水稻的kea1突变体的制种方法，其特征在于，通过利用⁶⁰Coγ射线对粳稻9522品系进行处理，对诱变的F2代中一中脉变白突变体三代回交，获得隐性单基因调控的稳定遗传的kea1突变体。

7.根据权利要求6所述突变体的制种方法，其特征是，所述的利用⁶⁰Coγ射线对粳稻9522品系进行处理是指：利用⁶⁰Coγ射线为诱变源，以280Gy处理剂量，处理粳稻9522种子。

8.一种根据权利要求1所述水稻钾离子外排逆向转运蛋白的应用，其特征在于，用于制备水稻抗逆株系。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征是，利用RNAi技术抑制水稻中KEA1基因的表达，从而控制水稻钾离子运输上的特性，通过抑制该蛋白的表达得以产生水稻抗逆株系。

10.一种根据权利要求8或9所述的应用水稻抗逆株系的农杆菌EHA105，其特征在于，为根癌土壤杆菌Agrobacterium tumefaciens，其保藏号为CGMCC No.4821，保藏日期为：2011年4月29日。 

11.一种根据权利要求6所述水稻的kea1突变体的应用，其特征在于，用于将突变体恢复到野生型表型。

12.一种消除权利要求11所述水稻的kea1突变体的应用，其特征在于，通过将SEQ ID NO.4所示的基因组序列片段通过BamHI和SalI插入到用于转化水稻的双元载体pCAMBIA1301载体中；并将载体通过电击导入农杆菌EHA105，使用遗传转化手段转化突变体kea1和野生型9522成熟胚愈伤得以实现。

13.一种根据权利要求11或12所述的应用得到的野生型农杆菌EHA105，其特征在于，为根癌土壤杆菌4grobacterium tumefaciens，其保藏号为CGMCC No.4820，保藏日期为：2011年4月29日。

14.一种根据上述任一权利要求所述蛋白的应用，其特征在于，用于将KEA1蛋白定位在叶绿体上。

15.根据权利要求14所述的应用，其特征是，所述的叶绿体来自烟草叶片。

16.根据权利要求14或15所述的应用，其特征是，通过引物扩增SEQ ID NO.5作为蛋白叶绿体定位信号肽，将该片段通过AflIII/NcoI和BglII插入到改造过带有eGFP标签的双元载体pCAMBIA1301载体中构建得到p1301:SigKEA1:eGFP载体，通过电击导入农杆菌GV3101，使用农杆菌注射瞬时转化手段转化烟草叶片得以实现。

17.根据权利要求16所述的应用，其特征是，所述的引物序列为：

Sig-1F：5′ccacatgtggATGGATTTGTCTAGGTTTACTGCC 3′，

Sig-3R：5′gaagatctCTCGGTATTATCGACTACTGAGCC 3′。

18.一种根据权利要求14至17中任一所述的应用得到的农杆菌GV3101，其特征在于，为根癌土壤杆菌Agrobacterium tumefaciens，其保藏号为CGMCC No.4823，保藏日期为：2011年4月29日。