[发明专利]一种高纯度牛扁碱的制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及中药有效成分的分离纯化方法，具体地说涉及一种高纯度牛扁碱的制备方法。

背景技术：

二萜生物碱是一类结构比较复杂的多环含氮化合物，具有较强的毒性和广泛生物活性，多年以来一直是药物学家寻找新药和先导化合物的一个重要来源，也是植物化学分类学家研究的热点。二萜生物碱绝大部分分布于乌头属和翠雀属中，在我国，乌头属植物大约有170余种，翠雀属植物近120种，它们广泛分布在全国各地，尤以西南地区最为集中，其中许多早已是我国民间常用的中草药。二萜生物碱不仅是这类植物的有效成分和毒性成分，而且也被认为是它们的特征化学成分。有文献报道，从康定乌头根、光裸翠雀、聚伞翠雀、三小叶翠雀花等植物中分离得到牛扁碱。

牛扁碱(lycotonine)，分子式：C₂₅H₄₁NO₇，分子量为467.60，结构式为：

R＝CH₂OH

陈立书等从康定乌头根中分离得到牛扁碱，采用盐酸溶液渗漉提取，通过强酸型苯乙烯阳离子交换树脂柱，乙醇回流提取、酸溶、碱调、氯仿萃取、硅胶柱反复洗脱得到牛扁碱，该方法操作繁琐，制备量小，仅适宜于实验室成分分析鉴别。

发明内容：

本发明的目的是提供一种高纯度牛扁碱的制备方法，以克服现有技术中的上述问题。

一种高纯度牛扁碱的制备方法，其特征在于它包括：(1)制备上相固定相、下相流动相的溶剂体系；(2)使色谱仪柱子中充满固定相，调整主机转速，将流动相泵入柱内；(3)将200-2000mg牛扁碱粗提物以20-100ml流动相溶解，由进样阀进样，根据检测器紫外图谱接收目标成分，将流分进行浓缩结晶，得到高纯度牛扁碱单体。

所述的溶剂体系由氯仿、甲醇和盐酸水溶液组成，体积比为8-20∶2-7∶2-7，盐酸水溶液优选0.2-0.5MHCl。

所述的溶剂体系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇和盐酸水溶液组成，体积比为0.5-3∶2-6∶1-4∶3-7，盐酸水溶液优选0.2-0.5MHCl。

本发明采用高速逆流色谱仪，配以适宜的溶剂体系对牛扁碱进行分离纯化，避免了不可逆吸附所造成的损失，提高了回收率，并具有制备量大、分离效率高、产品纯度好等优点，易于推广使用。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明进行说明。

实施例1：

选取氯仿-甲醇-0.2MHCl体系在逆流色谱仪分离纯化牛扁碱，先按10∶4∶3体积比将上述溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后，静置，待平衡30min后，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，称取100mg牛扁碱粗提物粉末溶于10ml下相中待用。进样前，先用固定相泵入色谱柱中，使充满整个柱子，调整主机转速为900r/min，以3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，由进样阀将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器，接收目标成分，得到牛扁碱流分，浓缩冻干后进行结晶，得牛扁碱，经HPLC测定其纯度达到98％。

实施例2：

选取氯仿-甲醇-0.5MHCl体系在逆流色谱仪分离纯化牛扁碱，先按16∶5∶7体积比将上述溶剂组分配置于分液漏斗中，摇匀后，静置，待平衡30min后，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，称取150mg牛扁碱粗提物粉末溶于10ml下相中待用。进样前，先用固定相泵入色谱柱中，使充满整个柱子，调整主机转速为920r/min，以3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，由进样阀将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器，接收目标成分，得到牛扁碱流分，浓缩冻干后进行结晶，得牛扁碱，经HPLC测定其纯度达到98％。

实施例3：