[发明专利]一种结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及结核分枝杆菌耐药突变的检测技术，特别涉及一种结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变的检测方法及试剂盒，该方法是一种基于双标记自淬灭探针的探针熔解曲线分析技术，用于检测结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药突变。

背景技术

乙胺丁醇是治疗肺结核的药物之一，它是一种阿拉伯糖类似物，影响细胞壁分枝菌酸-阿拉伯半乳聚糖-白聚糖复合物形成，发挥抗分枝杆菌作用。据2000年全国结核病流行病学调查的结果可知，乙胺丁醇的平均耐药率为1.3％。目前其耐药检测仍需进行培养和药敏实验确认，检测周期长，工作量大，且乙胺丁醇药敏结果符合率偏低(1、Johnson，R.，Jordaan，A.M.，Pretorius，L.，Engelke，E.，van der Spuy，G.，Kewley，C.，et al.Ethambutol resistance testing by mutation detection.Int J Tuberc Lung Dis.2006，10(1)，68-73)，这极不利于病情治疗及疫情控制。所以临床需更快、更准、更可靠的新方法。近年来，随着分子生物学理论和技术的发展，耐药机制及耐药的分子基础逐步被阐明，为各种方法的建立提供一个新的平台。

最近研究表明乙胺丁醇耐药与调控阿拉伯糖基转移酶表达的embABC操纵子基因突变有关，该操纵子由embA、embB及embC三个基因组成(2、Telenti，A.，Philipp，W.J.，Sreevatsan，S.，Bernasconi，C.，Stockbauer，K.E，Wieles，B.，et al.The emb operon，a gene cluster of Mycobacterium tuberculosis involved in resistance to ethambutol.1997，Nat Med，3(5)，567-570.)，其中embB基因的突变是耐乙胺丁醇的主要分子机制，约47％～70％的耐乙胺丁醇菌株与embB基因突变有关(3、Lee，H.Y，Myoung，H.J.，Bang，H.E.，Bai，G.H.，Kim，S.J.，Kim，J.D.，et al.Mutations in the embB locus among Korean clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis resistant to ethambutol.2002，Yonsei Med J，43(1)，59-64.)，而其中55％的突变发生在embB 306密码子上，此外embB 406及embB 497(4、Ramaswamy，S.V.，Amin，A.G.，Goksel，S.，Stager，C.E，Dou，S.J.，El Sahly，H.，et al.Molecular genetic analysis of nucleotide polymorphisms associated with ethambutol resistance in human isolates of Mycobacterium tuberculosis.2000，Antimicrob Agents Chemother，44(2)，326-336.)也是常见的突变位点。最新研究embB 368、embB 378及embB 380的突变与乙胺丁醇耐药有一定的联系(5、Srivastava，S.，Garg，A.，Ayyagafi，A.，Nyati，K.K.，Dhole，T.N.，&Dwivedi，S.K.Nucleotide polymorphism associated with ethambutol resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis.2006，Curr Microbiol，53(5)，401-405.)。