[发明专利]Toll样受体5激动剂stFla抗肺纤维化的用途

说明书

技术领域

本发明设计Toll样受体5激动剂stFla在治疗肺纤维化中的新用途，属于医药技术领域。

背景技术

组织异常重构是导致器官功能衰竭的主要原因，而纤维化作为组织重构的重要病理表现之一，是当今临床许多疾病致残、致死的主要原因，严重威胁人们的健康和生命。肺纤维化(Pulmonary fibrosis)是多种肺间质性炎症疾病的主要病理改变，包括哮喘、慢性支气管炎、支气管扩张、肺结核、肺癌、间质性肺病等，其典型特征为过度纤维化组织替代功能性肺组织，导致肺功能受损。近年来肺纤维化发病率和致死率呈不断上升趋势。例如特发性肺纤维化临床诊断明确后平均生存时间仅为3到5年。肺纤维化的确切发病机制至今尚未完全阐明。但已有的研究结果表明，肺泡持续性损伤、细胞外基质反复破坏-修复、持续的炎症反应都是该疾病的重要影响因素。遗憾的是，对于肺纤维化这类预后差、致残率及死亡率高的慢性复杂疾病，至今还没有真正有效的药物问世。除2008年吡非尼酮在日本获准用于治疗特发性肺间质纤维化(对该药的效果美国FDA仍有质疑)外，还没有其它有效的药物和治疗方法。因此，深入研究肺纤维化的发生机制，并在此基础上发现新药靶、开发新药物迫在眉睫。

博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型是迄今为止应用最广泛，与人类肺纤维化发生发展最为相似的动物模型。小鼠肺纤维化的诱导因素包括高浓度氧、石棉、二氧化硅、放射线等，但只有博莱霉素导致的肺部病变具有典型的间质性肺纤维化病理特征：早期为弥漫性肺泡炎，肺泡上皮损伤，肺泡单位结构紊乱，随后大量间质细胞增生，细胞外基质进行性聚集以致取代正常的肺组织结构，严重影响肺部功能。因此，使用博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型具备广泛的代表意义。

模式识别受体家族成员Toll样受体(Toll-Like Receptors，TLRs)是先天免疫系统的重要组成部分，并且TLRs的活化信号影响着获得性免疫应答的方向。虽然目前未见TLRs与肺纤维化发生、发展的直接证据，但大量的研究报道TLRs与多种纤维化疾病有密切联系，例如本实验室前期研究发现，无论是敲除TLR2还是治疗性给予中和性TLR2抗体均可显著抑制肺脏抑制性免疫微环境的形成，降低博来霉素所致肺损伤、纤维化和动物死亡；治疗性给予TLR4激动剂可改善博来霉素或二氧化硅所致小鼠肺纤维化；预防性或治疗性给予TLR9激动剂能够显著改善单侧输尿管结扎导致的小鼠肾纤维化病变。

TLR5是Toll样受体家族的一员，表达于细胞表面，鞭毛蛋白是目前鉴定到的唯一的TLR5特异性配基。TLR5能够迅速识别鼠伤寒沙门菌、李斯特菌、铜绿假单胞菌等细菌表面的鞭毛蛋白而激活先天免疫应答。Gewirtz等首先发现预先给予鞭毛蛋白能够明显提高小鼠对口服化学制剂、细菌、轮状病毒以及辐射的抵抗力。stFla是来源于S.thyphimurium(鼠伤寒沙门菌)细胞壁鞭毛蛋白单体。与TLR4激动剂LPS不同，TLR5特异性配基stFla能够激发温和的先天免疫反应，在小鼠肿瘤模型上证实具有较强的肿瘤抑制活性。

发明内容

针对肺纤维化危害严重及缺少临床有效药物和治疗方法的现状，本发明提供了一种新的技术方案，即利用Toll样受体5激动剂用于治疗肺纤维化。优选Toll样受体5激动剂选自stFla。

本发明通过系统的研究发现对于C57BL/6小鼠经气管内注射博莱霉素(5U/Kg)造成肺纤维化模型，在造模后14天开始，腹腔注射stFla(5ug/kg/3day)至第35天。通过病理组织学及生化检测等方法分别分析和评价博莱霉素灌注小鼠肺部炎症、损伤和纤维化的改变，发现激活TLR5信号通路能显著降低博莱霉素灌注小鼠的死亡率；激活TLR5信号通路显著降低博莱霉素诱导的肺部炎症和损伤，减小博莱霉素所致肺纤维化，包括降低肺部胶原沉积、羟脯氨酸含量和α-SMA的表达。

实验结果表明，TLR5激动剂stFla能抑制博莱霉素所致肺纤维化，改善肺纤维化小鼠的肺部炎症，大大降低其死亡率。

术语及简称

BLM博莱霉素

TLR5Toll样受体5

α-SMAα平滑肌肌动蛋白

附图说明

Sham：假手术组

BLM：模型组

stFla：TLR5激动剂stFla治疗组

图1.治疗性给予TLR5激动剂stFla显著改善BLM诱导肺纤维化小鼠生存率。

图2.stFla显著减轻BLM所致肺部炎症。

A，肺HE染色；B，肺部炎症评分。

图3.stFla显著改善BLM诱导肺纤维化小鼠肺脏脏器指数