[发明专利]一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法，属于药物分析技术领域。

背景技术

有关物质检查是药品质量控制的重要指标。建立起准确测定杂质的检验方法尤其重要，要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，及其对分析方法的筛选与验证。盐酸美克洛嗪片在美国药典32版有收录。美国药典32版中收载此品种，制剂中有关物质检测方法主要存在以下两个问题1.在流动相比例发生微小改变时，该活性成分保留时间相对变化较大；2.该方法中设置流速为2.0ml/min，样品溶液浓度较大，对仪器，色谱柱损害较大且需要流动相的量很大。

发明内容

本发明的目的是提供一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法。

本发明盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法是采用高效液相色谱法，其色谱条件为：色谱柱为苯基柱，规格为250 mm×4.6 mm，5 μm；流动相：A为甲醇，B为pH 7.0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0→5.0min，A为80%；5.0→35.0min，A由80%变为95%；35.0→35.01min，A由95%变为80%；35.01→45.0min，A为80%；流速1.0 ml/min；检测波长：225 nm；柱温为30℃；理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000；

测定方法：本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为60-90%，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，静置取上层液体滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，加稀释剂溶解制成1ml中含10μg盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20μl，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20％～30％，取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。

本发明中所使用色谱柱可以为通用的苯基柱，优选为型号为Kromasil 100-5 Phenyl的色谱柱。

本发明中样品溶液配制过程中用到的稀释剂为流动相A和B混合溶液，其中A为60-90%，A的比例优选为80%。

本发明所述梯度洗脱中流动相的百分比和稀释剂中的百分比均为常温下的体积比。

为证实该方法准确可靠，重复性好，能够用于控制盐酸美克洛嗪片的有关物质，进行如下方法学验证：

1．仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪，Shimadzu  LC-20AT；色谱工作站，Shimadzu  LC Solution；分析天平，梅特勒托利多；pH计，梅特勒托利多。 

1.2 试药

盐酸美克洛嗪片，自制，制剂配方为盐酸美克洛嗪：50.0g、微晶纤维素PH102：40.0g、乳糖Flowlac100：320g、预交化淀粉：20g、磷酸氢钙：50g、PEG6000：7.5g、硬脂酸镁：7.5g、微粉硅胶：5.0g，工艺采用粉末直接压片法；盐酸美克洛嗪对照品，USP；甲醇，色谱纯；其它均为分析纯。

2．方法

2.1检测波长的选择

经二极管阵列检测器采集光谱图分析，可显示各主要峰在200～400 nm之间吸收光谱，选择各杂质峰及主峰均有较强吸收的波长作为检测波长。

2.2流动相条件考察

实验中分别以甲醇-磷酸盐缓冲溶液、甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲溶液等不同浓度、不同比例的流动相系统进行等度和梯度洗脱试验，比较上述各条件下的色谱图，选择分离效果最佳、时间尽可能短的流动相条件。

2.3色谱柱的选择

选择十八烷基键合硅胶为填料（L1）的型号为Phenomenex Gemini C18和苯基键合硅胶为填料（L11）的型号为Kromasil 100-5 Phenyl的色谱柱，按照确定的色谱条件分别进行试验。以主峰与杂质峰及主要杂质间分离状况为指标，考察不同类型的色谱柱对分离效果的影响。

2.4专属性试验

专属性试验

酸破坏：取本品细粉适量（约相当于盐酸美克洛嗪约50 mg），置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声10min后加1mol/L盐酸10ml，放置80℃水浴中2小时，取出并冷至室温，用1mol/L氢氧化钠溶液中和，加稀释剂至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。