[发明专利]一种自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体来就涉及一种产生活性酵母细胞衍生物的方法。

背景技术

酵母细胞有很强的应激反应能力，当它受到物理、化学等应激时，很快就会合成许多具有自我保护和修复性的一类物质，这些物质具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质，称为活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative, 简称LYCD)，有重要的医用和美容价值。LYCD的主要活性成份包括大量的应激蛋白、多肽和氨基酸。

LYCD是一种特别有效、安全的活性成分，具有减轻伤害的作用。国内外已有许多以酵母及其衍生物为原料的化妆品问世； LYCD具有刺激血管形成和加速伤口愈合的作用，是一种治疗痔疮极为有效的药用成分；LYCD还是一种良好的治疗烫伤和机械损伤的药品添加剂，对牛皮癣等皮肤病也有良好的疗效。最近的研究发现，LYCD对由紫外线引起的DNA损伤具有修复作用，对鼓膜具有再生功能。当前LYCD的应用范围正在不断扩大。如美国己从药用级的活性酵母细胞衍生物制得浓缩产品BiofactorsTM，用于去皱膏、疤痕净及婴儿护肤用品等产品的生产。

自然固态堆积发酵是原料通过糊化、适当冷却，加入高温大曲、翻拌均匀，收堆，在自然开放的条件下堆积发酵。目前还未见到用自然固态堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能产生具有较强活性的LYCD，其具有医药、保健和美容价值的自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法。

本发明的一种自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法，包括以下步骤：

（1）发酵基质糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均匀，收堆，堆积发酵；用曲量大小、原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行常规调节，可重复多次发酵；

（2）在发酵基质温度为46-52℃、酒精浓度为2%～12%(v/v)时终止发酵；

（3）2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养2h后，离心，液氮冷冻破壁，用4℃的无菌水转移破碎物，10000g离心，上清液即为LYCD。

上述的一种自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法，其中：发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，可配用其他原料。

上述的一种自然堆积发酵产生活性酵母细胞衍生物的方法，其中：发酵时间为３～７天。

本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：自然堆积发酵充分网罗、富集生产环境中的大量微生物。在自然气候条件下，在堆积发酵过程中，酵母数量不断增加，同时产生能量，使发酵基质温度逐渐增高；在厌氧发酵条件下发酵产生酒精，当发酵基质温度为46-52℃、酒精浓度为2%~12%(v/v)时可剌激酵母细胞产生具有较强活性的LYCD，具有医药、保健和美容价值。

附图说明

图1为不同应激温度对产生LYCD的影响；

图2 不同酒精浓度刺激对产生LYCD的影响。

具体实施方式

以下通过试验例和具体实施方式来进一步说明本发明的有益效果。

试验例

LYCD的制备：发酵基质以粉碎和糊化高梁为主，可配用其他原料，固态发酵。糊化、冷却，加入传统高温大曲、翻拌均匀，收堆，堆积发酵。用曲量大小、原料糊化程度、堆积发酵程度根据自然发酵情况进行调节。可重复多次发酵。发酵时间：３～７天。在发酵基质温度为46-52℃、酒精浓度为2%～12%(v/v)时终止发酵，2000g离心20min收集菌体，无菌水洗涤一次，再加入培养基继续培养2h后，离心，液氮冷冻破壁，用4℃的无菌水转移破碎物，10000g离心，上清液即为LYCD。

LYCD的活性测定：采用紫外分光光度法测定LYCD的活性，量取一定量的活性测定菌株的培养液，加入一定量的LYCD，30℃水浴振荡培养1h，测定反应前后菌体培养液OD256nm值的变化，以此来反映LYCD活性的大小。

从图1中可以看出，当刺激温度为46~48℃时，OD值逐渐的增大，即LYCD的活性逐渐增强，在47~48℃时出现最大值，当温度为48~52℃时，OD值逐渐的减小，即LYCD的活性逐渐的下降。作用温度为46~52℃时，可产生LYCD。