[发明专利]酵母展示脂肪酶催化合成维生素C共轭亚油酸酯的方法无效
| 申请号： | 201110108725.9 | 申请日： | 2011-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN102212570A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | 阮晖;徐娟;地里热巴;周陈伟;王睿之;林吉恒;何国庆 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12P17/04 | 分类号： | C12P17/04;C12N15/63;C12N1/19;C12N9/20;C12R1/84 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酵母 展示 脂肪酶 催化 合成 维生素 共轭 油酸 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种酵母展示脂肪酶催化合成L-抗坏血酸共轭亚油酸酯的方法，包括：
将L-抗坏血酸和共轭亚油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸共轭亚油酸酯；
所述的酵母展示脂肪酶通过如下方法制备：
将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；
所述的重组质粒由原始载体pPIC9K和依次插入原始载体pPIC9K中MFα1信号肽下游的脂肪酶基因和毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因组成。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以每升有机溶剂计，L-抗坏血酸、共轭亚油酸和酵母展示脂肪酶的加入量分别为15～35g、100～300ml、50～100g。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为四氢呋喃和正己烷的混合物，两者体积比为1∶2～2∶1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物印迹所采有配体为油酸。
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