[发明专利]非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法及测定试剂

权利要求书

1.一种非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法，其特征在于其包括如下步骤：将待测样本在酶循环反应系统中，进行如式1～3所示的反应，测定酶循环反应生成的氨的生成速率并计算，即得待测样本中非对称二甲基精氨酸含量；所述的酶循环反应系统包括二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、以及氨基甲酰磷酸或其盐；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述的二甲基精氨酸二甲胺水解酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的瓜氨酸水解酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的鸟氨酸氨甲酰转移酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的氨基甲酰磷酸或其盐的用量为0.1～50mmol/L。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酶循环反应系统为pH6～9的缓冲液体系；

所述的缓冲液较佳的为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙基磺酸)缓冲液；

所述的缓冲液的浓度较佳的为20～300mmol/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酶循环反应系统还包括酶稳定剂；

所述的酶稳定剂较佳的为甘露糖醇、甘油、聚乙二醇、EDTA、钾离子、钠离子、牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂中的一种或多种。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酶循环反应系统中还包括α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶，所述的测定酶循环反应生成的氨的生成速率的方法为谷氨酸脱氢酶反应检测法，所述的谷氨酸脱氢酶反应的反应式如式4所示；

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述的谷氨酸脱氢酶的用量为0.1～50kU/L；

和/或，所述的α-酮戊二酸或其盐的用量为1～50mmol/L，较佳的为1～20mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶的用量为0.1～1mmol/L，较佳的为0.2～0.3mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶为NADH、NADPH、硫代NADH或硫代NADPH。

7.一种非对称二甲基精氨酸的测定试剂，其特征在于其包括下述成分：二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、以及氨基甲酰磷酸或其盐。

8.如权利要求7所述的测定试剂，其特征在于：所述的测定试剂还包含α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶；

所述的谷氨酸脱氢酶的用量较佳的为0.1～50kU/L；

和/或，所述的α-酮戊二酸或其盐的用量较佳的为1～50mmol/L，更佳的为1～20mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶较佳的为0.1～1mmol/L，更佳的为0.2～0.3mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶较佳的为NADH、NADPH、硫代NADH或硫代NADPH。

9.如权利要求7所述的测定试剂，其特征在于：所述的测定试剂还包含酶稳定剂和/或缓冲成分；

所述的酶稳定剂较佳的为甘露糖醇、甘油、聚乙二醇、EDTA、钾离子、钠离子、牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂中的一种或多种；

所述的缓冲成分较佳的为能形成pH6～9的缓冲液的成分；所述的缓冲液较佳的为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙基磺酸)缓冲液；所述的缓冲液的浓度较佳的为20～300mmol/L。

10.如权利要求7所述的测定试剂，其特征在于：所述的测定试剂为固体干粉形式，或者还包括水，为水溶液形式；所述的水溶液形式为能直接使用的水溶液形式，或需经稀释才使用的浓缩液形式。