[发明专利]一种液相色谱－质谱法测定中药中邻苯二甲酸酯含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药中邻苯二甲酸酯含量的测定方法，具体涉及采用液相色谱-质谱法测定党参、白芍、赤芍、地黄等中药中邻苯二甲酸酯含量的方法。 

背景技术

邻苯二甲酸酯(PAEs)，是一类广泛应用的增塑剂，能起到软化作用，它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品(如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液)等数百种产品中。研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，可干扰内分泌，使男子精液量和精子数量减少，精子运动能力低下，精子形态异常，严重的会导致睾丸癌，是造成男子生殖问题的“罪魁祸首”。化妆品中的这种物质会通过女性的呼吸系统和皮肤进入体内，如果过多使用，会增加女性患乳腺癌的几率，还会危害到她们未来生育的男婴的生殖系统(参见沈霞红等，邻苯二甲酸酯类胚胎生殖毒性研究进展[J]，中国公共卫生，2010年9月，26(9)：1215)。 

鉴于邻苯二甲酸酯类成分的危害，各国政府对食品药品包装材料、玩具、化妆品中邻苯二甲酸酯的分布及检测予以极大关注，特别是欧盟及美国等发达国家，对此设定了严格的限量规定。欧盟颁布的关于邻苯二甲酸酯的指导标准(第2005/84/EC)，已于2007年1月16日起开始执行。2009年2月6日，美国消费品委员会发布指导性文件，要求自2009年2月10日起，儿童玩具或儿童护理用品中邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)等6种邻苯二甲酸酯的含量不得超过0.1％。我国在食品、化妆品、玩具、环境等介质中的邻苯二甲酸酯类检测已有报道，但尚无产品中邻苯二甲酸酯类成分的限量标准。 

中药材在种植加工过程中可能会被污染。因此，急需开发药品中邻苯二 甲酸酯类成分的高效分析测定方法。 

发明内容

本发明提供一种采用液相色谱-质谱测定中药中邻苯二甲酸酯含量的方法。该方法可用于中药中邻苯二甲酸酯残留的筛查，为拟定药品中邻苯二甲酸酯的标准提供技术服务。 

本发明通过如下技术方案实现： 

提供一种用于测定中药中邻苯二甲酸酯含量的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： 

(1)对待测中药样品进行预处理； 

(2)通过液相色谱-质谱法测定经预处理后的样品中一种或多种邻苯二甲酸酯的含量。 

根据本发明的一个优选的实施方式，所述邻苯二甲酸酯包括邻苯二甲酸单甲酯、邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸单丁酯、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二异丙酯、邻苯二甲酸二正丙酯、邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸丁苄酯(BBP)、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP)、邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)、邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)。 

根据本发明的一个优选的实施方式，所述中药可以包括党参、白芍、赤芍和地黄等。 

根据本发明的一个优选的实施方式，所述样品的预处理包括用第一种溶剂超声或回流或索氏提取，然后旋转蒸发至干，再用第二种溶剂复溶的步骤。优选地，所述第一种溶剂可以选自正己烷、石油醚(60～90℃)或氯仿，特别优选正己烷；所述第二种溶剂可以选自甲醇、氯仿甲醇溶液(优选体积比3∶1)或正己烷，特别优选甲醇。 

根据本发明的一个优选的实施方式，所述超声提取的条件是：32～40kHz的超声频率下，温度25～45℃下水浴超声提取30～60min，优选在40kHz频率下，在30℃下水浴超声提取30min；回流提取的条件是：80～100℃回流提取1h～2h，优选在90℃回流提取1h；索氏提取的条件是：80～100℃索氏提取4～8h，优选在90℃提取6h。术语“索氏提取”指的是采用索氏提取器(250ml平底烧瓶，80ml抽出筒)，利用溶剂回流及虹吸原理，使固体物质连续不断 地被纯溶剂萃取。 

根据本发明的一个特别优选的实施方式，样品的预处理包括：精密称取中药样品粉末，精密加入正己烷，超声，滤过，精密量取续滤液旋转蒸发至干，精密加入甲醇使溶解，滤过。 

根据本发明的一个优选的实施方式，所述步骤(2)中液相色谱-质谱法的色谱条件为：采用C 18柱，流动相由A相和B相组成，A相为甲酸水溶液，B相为乙腈或甲醇，采用梯度洗脱。 

优选地，所述C18柱的粒径为1.7～5μm，柱内径2.1～4.6mm，柱长为5～25cm，更优选为Agilent ZORBAX SB-C18柱。A相的浓度为0％～0.1％，优选0.05％(体积)；A∶B体积比为50～2％∶50～98％，流速为0.3ml/min。