[发明专利]吐温80化学组成的高效液相色谱分析法

说明书

技术领域

本发明涉及一种仪器分析方法，具体涉及一种用高效液相色谱蒸发光散射法测定吐温80的化学组成，并使用高效液相色谱-质谱联用对吐温80的化学组成进行鉴定。

背景技术

吐温80是由山梨醇失水后与油酸酯化及与环氧乙烷聚合而成的一种非离子表面活性剂。由于吐温80生产的工艺路线及反应控制不同，使得其的组成多样，而保证组分的均一、可控是吐温80在药品中安全使用的重要前提。因此，测定吐温80中的组分对配方研制、工艺生产和品质控制都有十分重要的意义。

目前的吐温80的化学成分指标主要有测定羟值、皂化值、脂肪酸组成等，但这些方法得出的结果都是吐温80不同化学组分化学成分指标的总和，无法反应不同来源的吐温80在化学组成上的差异，专属性差。并且吐温类表面活性剂有一个共同的特点，其结构中都没有共扼双键，所以没有紫外吸收，这就增加了检测的难度。

近年来，随着蒸发光散射检测器和串联质谱(MS/MS)等通用性检测技术的发展，液相色谱和蒸发光散射检测器及质谱联用在复杂化合物分析中得到广泛的应用。但目前尚未见采用液相色谱和蒸发光散射检测器及质谱联用分析吐温80样品组分的相关报道。

在理想的状态下，同一品牌型号吐温80的各种组分含量应基本相同，根据一失水山梨醇聚氧乙烯油酸酯与异山梨醇聚氧乙烯油酸酯含量的关系，可以初步判定吐温80样品是否符合药典的要求。采用液相色谱和蒸发光散射检测器及质谱联用分析可同时快捷的分析这这些组分的含量，对于实际吐温80生产中的应用意义重大。

发明内容

本发明的目的是克服现有的检测方法专属性差的问题，提供一种灵敏度适宜、专属性强的吐温80化学组成的高效液相色谱分析法。

本发明的目的可以通过以下措施达到：

一种吐温80化学组成的高效液相色谱分析法，其特征在于反相键合硅胶为填充剂；流动相采用乙腈-水-四氢呋喃系，或甲醇-水-四氢呋喃体系；检测器采用蒸发光散射检测器。

流动相体系采用二元梯度洗脱；A流动相为体积比为0～100％乙腈：100～0％水，或体积比为0～100％甲醇：100～0％水；B流动相为纯四氢呋喃。

流动相的流速为0.2～2mL·min^-1，柱温为5～65℃。

蒸发光散射检测器中，漂移管温度为25～150℃，雾化气体流速为0.5～4L·min^-1。

利用高效液相色谱法进行物质分离测定主要是根据待测物质的理化性质确定分离模式。选择主要的色谱条件：色谱柱、流动相组成和检测器类型。

本方法利用反相键合硅胶柱、特定的流动相和检测器，流动相的组成和检测器是其关键，蒸发光散射检测器很好解决了没有紫外吸收的问题。

本发明还利用液相色谱质谱联用技术(LC-MS/MS)对吐温80的化学组成进行鉴定。

本发明采用高效液相色谱蒸发光散射检测技术，灵敏度适宜、专属性强，能很好地将吐温80中的异山梨醇聚氧乙烯、一失水山梨醇聚氧乙烯一油酸酯、异山梨醇聚氧乙烯一油酸酯、一失水山梨醇聚氧乙烯二油酸酯、异山梨醇聚氧乙烯二油酸酯、一失水山梨醇聚氧乙烯三油酸酯、一失水山梨醇聚氧乙烯四油酸酯有效的分开，从而能测定它们各自的含量。同时，利用液相色谱质谱联用技术(LC-MS/MS)对这些吐温80的化学组分进行鉴定。

附图说明

图1为实施例1的吐温80高效液相色谱蒸发光散射测定的色谱图。

其中编号为A的峰为异山梨醇聚氧乙烯；编号为B的峰为一失水山梨醇聚氧乙烯一油酸酯；编号为C的峰为异山梨醇聚氧乙烯一油酸酯；编号为D的峰为一失水山梨醇聚氧乙烯二油酸酯；编号为E的峰为异山梨醇聚氧乙烯二油酸酯；编号为F的峰为一失水山梨醇聚氧乙烯三油酸酯；编号为G的峰为一失水山梨醇聚氧乙烯四油酸酯。

图2为实施例1的吐温80高效液相色谱蒸发光散射测定的色谱图(局部放大)。

图3为实施例2的吐温80高效液相色谱蒸发光散射测定的色谱图。

图4为实施例2的吐温80高效液相色谱蒸发光散射测定的色谱图(局部放大)。

图5为实施例3的吐温80高效液相色谱质谱总离子流色谱图。

图6为实施例3中吐温80编号为A的色谱峰MS全扫描质谱图。

图7为实施例3中吐温80编号为B的色谱峰MS全扫描质谱图。

图8为实施例3中吐温80编号为C的色谱峰MS全扫描质谱图。

图9为实施例3中吐温80编号为D的色谱峰MS全扫描质谱图。