[发明专利]电化学检测可卡因的方法及其中使用的三段式适配体探针

权利要求书

1.用于电化学检测可卡因的三段式适配体探针，所述三段式适配体探针在特异性识别可卡因，包括具有巯基修饰的探针1、具有氧化还原基团，优选氧化还原基团亚甲基蓝修饰的探针2和未修饰的探针3，所述探针1、2和3在存在可卡因时，与可卡因形成络合物。

2.权利要求1所述的三段式适配体探针，其中所述探针1、2和3的序列分别为5’-HS-C6-TTTGTTCTTCAAT，5’-GGGAGTCAAGAAC-MB和5’-AGTGGGACGACA，其中MB是氧化还原基团亚甲基蓝，HS是巯基。

3.一种电化学检测可卡因的方法，其特征在于使用根据权利要求1或2所述的三段式适配体探针，包括以下步骤：

(1)将所述探针1包被到金电极上，形成检测电极；

(2)将所述探针2和所述探针3与空白对照或待测样品混合，形成空白对照混合物或待测样品混合物；和

(3)将所述检测电极、对电极和参考电极插入到所述空白对照混合物或待测样品混合物中，进行电化学检测，当待测样品产生的电流信号大于空白对照产生的电流信号时表示所述待测样品中含有可卡因。

4.权利要求3所述的方法，其特征在于：

在所述步骤(1)中，将所述金电极浸泡在含有所述探针1和还原试剂的反应缓冲溶液中；然后用去离子水冲洗电极，并浸泡在含有1mM6-mercaptohexanol的反应缓冲溶液中；电极然后用去离子水冲洗，浸泡在反应缓冲溶液中备用，其中所述探针1的量优选为5-50μL，100μM，所述还原试剂优选为最终浓度为5-50μM的TCEP(tris-(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride)，反应缓冲溶液优选为10mM，1M NaCl磷酸盐缓冲溶液。

5.权利要求3或4所述的方法，其特征在于：

在所述步骤(3)中，电化学检测采用方波伏安法，其中使用铂丝作为对电极，Ag/AgCl电极作为参考电极；方波伏安法测量的扫描电势、电势扫描梯度、振幅和频率可以根据检测结果进行优化，其中优选地，扫描电势相对于Ag/AgCl电极为从0到-0.4V，电势扫描梯度为0.001V，振幅0.05V，频率60Hz；所述反应缓冲溶液为10mM，1M NaCl磷酸盐缓冲溶液，pH 7.0；所述探针3的浓度优选为0.1-10μM，所述探针2的浓度优选为0.1-10μM。

6.一种电化学定量检测可卡因的方法，其特征在于使用根据权利要求1或2所述的三段式适配体探针，包括以下步骤：

(1)将所述探针1包被到金电极上，形成检测电极；

(2)将所述探针2和所述探针3与一系列不同浓度的可卡因标准品或未知浓度的待测样品分别混合，形成一系列不同浓度的可卡因标准品混合物和待测样品混合物；

(3)将所述检测电极、对电极和参考电极插入到步骤(2)中配制的一系列不同浓度的可卡因标准品混合物中，进行电化学检测，根据不同浓度的可卡因标准品产生电流信号的变化绘制可卡因电化学检测的标准工作曲线；和

(4)将所述检测电极、对电极和参考电极插入步骤(2)中配制的待测样品混合物中，进行电化学检测，根据所述待测样品产生的电流信号的变化和步骤(3)中绘制的标准工作曲线确定所述待测样品中的可卡因浓度。

7.权利要求6所述的方法，其特征在于所述可卡因电化学检测的标准工作曲线满足如下关系：I＝11.866log₁₀C+12.303(r²＝0.9984)，其中C为可卡因的摩尔浓度，单位为μM，I为电流信号的百分比变化。

8.权利要求6或7所述的方法，其特征在于：

在所述步骤(1)中，将所述金电极浸泡在含有所述探针1和还原试剂的反应缓冲溶液中；然后用去离子水冲洗电极，并浸泡在含有1mM6-mercaptohexanol的反应缓冲溶液中；电极然后用去离子水冲洗，浸泡在反应缓冲溶液中备用，其中所述探针1的量优选为5-50μL，100μM，所述还原试剂优选为最终浓度为5-50μM的TCEP(tris-(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride)，反应缓冲溶液优选为10mM，1M NaCl磷酸盐缓冲溶液。

9.权利要求6-8中任一项所述的方法，其特征在于：

在所述步骤(3)和(4)中，电化学检测采用方波伏安法，其中使用铂丝作为对电极，Ag/AgCl电极作为参考电极；方波伏安法测量的扫描电势、电势扫描梯度、振幅和频率可以根据检测结果进行优化，其中优选地，扫描电势相对于Ag/AgCl电极为从0到-0.4V，电势扫描梯度为0.001V，振幅0.05V，频率60Hz；所述反应缓冲溶液为10mM，1M NaCl磷酸盐缓冲溶液，pH 7.0；所述探针3的浓度优选为0.1-10μM，所述探针2的浓度优选为0.1-10μM；所述不同浓度的可卡因标准品的浓度优选分别为0、1μM、10μM、100μM、1000μM。