[发明专利]一种纯化赛门苷Ⅰ的方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然药化分离领域，特别是涉及一种利用高速逆流色谱纯化赛门苷Ⅰ的方法。

背景技术：

赛门苷Ⅰ(sianenoside Ⅰ)属于葫芦烷三萜甙类化合物，分子式C₅₄H₉₂O₂₄，分子量1125.29，CAS号126105-12-2，分子结构

赛门苷Ⅰ是一种从罗汉果中提取的甜味成分，赛门甙Ⅰ的万分之一浓度的水溶液是蔗糖的563倍，具有抗癌的作用，抑制LDL的氧化作用，对糖尿病人有辅助疗效。美国西太平洋防癌基金会已将其低含量的赛门苷Ⅰ指定为防癌治癌的药物。

赛门苷Ⅰ分离纯化方法较少，所得产品一般为粗提物，多采用水提取或醇提取，上大孔树脂分离，阳离子树脂脱色等，如李雁群等采用国产材料和较为简单的方法来提取和纯化罗汉果甜苷，以水为溶剂的甜苷得率比乙醇水溶液的得率高，溶剂量以原料重6倍为宜；氢氧化钙作澄清剂澄清，强碱树脂脱色，AB-8吸附树脂吸附罗汉果甜苷，50％乙醇水溶液解吸。纯化赛门苷Ⅰ的方法多是采用硅胶柱层析分离和制备液相分离，如文献“罗汉果化学成分研究”，该文献采用75％乙醇回流提取，石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，氯仿萃取经两次硅胶柱层析，在氯仿石油醚重结晶，得到纯品赛门苷Ⅰ。现有纯化赛门苷Ⅰ工艺存在制备量较小，重现性差的技术缺陷。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种纯化赛门苷Ⅰ的方法，该方法易重现，制备量大。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种纯化赛门苷Ⅰ的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将罗汉果粉碎，加入5-15倍量40-60％甲醇提取2-3次，提取液减压回收甲醇，母液加适量水分散滤过，加入大孔树脂柱吸附，4-6BV40-60％甲醇溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩，得浓缩液；

2)上述浓缩液加甲醇至醇浓度50-70％，加活性炭共沸，脱色液滤过，加氯仿搅拌均匀静置分层，收集氯仿层，回收氯仿，得粗品；

3)上述粗品选用乙酸乙酯-正丁醇-磷酸水(pH2-3)溶液系统，采用高速逆流色谱分离，收集流分，减压干燥即得赛门苷Ⅰ纯品。

所述步骤1)中的提取方式可选冷浸或超声提取。

所述步骤1)中的大孔树脂型号可选HZ818、SPD-400或LSA-40中的一种。

所述步骤3)中的乙酸乙酯-正丁醇-磷酸水(pH2-3)溶液系统比例为：3-5∶2-4∶5-6。

本发明采用冷浸或超声提取可以减少色素和蛋白的溶出，大孔树脂吸附富集，醇溶液中氯仿萃取，提高了粗品中赛门苷Ⅰ的含量，可以减少直接萃取氯仿的用量，再采用高逆流色谱分离，可以提高产品收率，减少有机毒性试剂的用量以及对环境的污染。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1

罗汉果干果粉碎，取1kg，加入15倍量40％甲醇冷浸提取12小时，滤出提取液，再加5倍量40％甲醇冷浸8小时，合并提取液减压回收甲醇，母液加适量水分散滤过，加入HZ818大孔树脂柱吸附，水洗树脂至无糖色，取4BV60％甲醇溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩，浓缩液加甲醇至醇浓度50％，加1％的活性炭共沸1小时，脱色液滤过，加1/3体积的氯仿搅拌均匀静置分层，收集氯仿层，回收氯仿，得粗品5g。取用乙酸乙酯、正丁醇、磷酸水(pH2)溶剂按3∶2∶5混合，取上相注入高速逆流色谱仪螺旋管中，启动主机，把转速调至800r/min，以流速2ml/min泵入下相，用下相溶解粗品注入进样阀，收集赛门苷Ⅰ流分，减压干燥得赛门苷Ⅰ产品，含量98.5％。

实施例2

罗汉果干果粉碎，取1kg，加入10倍量60％甲醇超声提取2小时，滤出提取液，再加5倍量60％甲醇超声提取1小时，合并提取液减压回收甲醇，母液加适量水分散滤过，加入SPD-400大孔树脂柱吸附，水洗树脂至无糖色，取6BV40％甲醇溶液洗脱，收集洗脱液减压浓缩，浓缩液加甲醇至醇浓度70％，加0.5％的活性炭共沸1小时，脱色液滤过，加1/2体积的氯仿搅拌均匀静置分层，收集氯仿层，回收氯仿，得粗品3g。取用乙酸乙酯、正丁醇、磷酸水(pH3)溶剂按4∶3∶6混合，取上相注入高速逆流色谱仪螺旋管中，启动主机，把转速调至900r/min，以流速3ml/min泵入下相，用下相溶解粗品注入进样阀，收集赛门苷Ⅰ流分，减压干燥得赛门苷Ⅰ产品，含量98.1％。

实施例3：