[发明专利]基于fimY基因的沙门氏菌检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.基于fimY基因的沙门氏菌检测试剂盒，其特征在于，含有以下特异性引物：

上游外引物F3如SEQ ID NO.1所示，下游外引物B3如SEQ ID NO.2所示，上游内引物FIP如SEQ ID NO.3所示，下游内引物BIP如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的基于fimY基因的沙门氏菌检测试剂盒，其特征在于：还包括上游环引物LF如SEQ ID NO.5所示；下游环引物LB如SEQ ID NO.6所示。

3.根据权利要求2所述的基于fimY基因的沙门氏菌检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有24μL反应体系的试剂，所述24μL反应体系的试剂包括：浓度各为0.2 μmol/L的上游外引物F3和下游外引物B3,浓度各为0.8μmol/L的上游内引物FIP和下游内引物BIP, 浓度各为0.4μmol/L的上游环引物LF和下游环引物LB，浓度为1.0 mmol/L三磷酸脱氧核糖核苷酸混合液, 浓度为1mol/L的甜菜碱, PH值为8.8、浓度为25mmol/L 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 , 浓度为10 mmol/L 氯化钾, 浓度为10 mmol/L 硫酸铵, 浓度为5 mmol/L 硫酸镁, 质量百分数为0.1%的聚乙二醇辛基苯基醚, 8 单位Bst DNA 聚合片段酶, 余量为无RNA酶超纯水。

4.权利要求1～3任一项所述基于fimY基因的沙门氏菌检测试剂盒的检测方法，其特征在于，具体由以下步骤组成：

A、提取待测样品的DNA作为模板DNA，控制模版DNA水溶液的OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.6～2.0范围内，浓度在10～100ng/μl范围内；

B、在24μL反应体系的试剂中加入1μl待测模版DNA水溶液，并在60～65°C条件下保温60分钟，80°C保温5分钟终止反应液；

C、反应终止后，加入质量分数为10%的荧光染料赛博绿Ⅰ水溶液1μl,用肉眼观察颜色变化，如果颜色为橘黄色，说明待检样品不含沙门氏菌；如果颜色变为绿色，则说明样品中含有沙门氏菌。