[发明专利]一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法

权利要求书

1.一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法，其特征在于包括如下步骤：1)将菌种接入含有诱导物培养基中，摇床培养生产壳聚糖酶的发酵产酶工艺；2)酶纯化工艺；其中所述的海洋草酸青霉菌属诱导型产酶菌种，已于2010年12月在中国典型培养物保藏中心(武汉大学)登记保藏，保藏号为CCTCC M 2010349。

2.如权利要求1所述的一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法，其特征在于所述的发酵产酶工艺为：将海洋草酸青霉菌斜面活化后接入种子培养基pH7.2，在25℃下培养2天；再按9％的接种量接入含有诱导物的发酵培养基中，离心去除杂质与菌体，得到发酵后的粗酶液.。

3.如权利要求1所述的一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法，其特征在于：所述的种子培养基(g/L)组成为：淀粉10g，酵母膏1g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，(NH₄)SO₄2.5g，MgSO₄·7H₂O 0.25g，K₂HPO₄0.002g，NaCl 4g，CaCO₃6g，壳聚糖10g。

4.如权利要求1所述的一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法，其特征在于：所述的含有诱导物的发酵培养基为寡营养培养基，其组成的质量百分比为2～4％盐度的海水、0.2％～3％黄豆粉和0.5％～2.5％诱导物。

5.如权利要求4所述的一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法，其特征在于：所述的诱导物采用脱乙酰度50％的几丁质；脱乙酰度91％，分子量13万的壳聚糖；脱乙酰度68％，分子量6万的壳聚糖；脱乙酰度8.5％，分子量0.3万的低聚糖中的一种。

6.如权利要求4所述的一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法，其特征在于：所述的发酵培养基的pH为自然，培养温度为25℃，摇床100rpm培养4天。

7.如权利要求1所述的一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法，其特征在于所述的酶纯化工艺为：将发酵产酶后的粗酶液，利用0.45微米滤膜过滤或10000rpm离心分离，即得到较纯的酶。