[发明专利]美洲斑潜蝇的特异性快速PCR检测方法及所用的SS-COI引物和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种美洲斑潜蝇的特异性快速PCR检测方法及所用的SS-COI引物和试剂盒，属于分子生物学领域。

背景技术

美洲斑潜蝇Liriomyza sativae Blanchard，属双翅目、潜蝇科、斑潜蝇属，是一种世界性检疫害虫，我国农业部于1994年将其列为进境地植物检疫潜在性害虫，并制定了美洲斑潜蝇“九五”监测治理规划。美洲斑潜蝇寄主非常广泛，目前已知的寄主植物有36科100多种，严重受害的植物包括茄科、豆科、葫芦科、十字花科、菊科等，如葫芦科的黄瓜、甜瓜、西葫芦、西瓜、冬瓜、丝瓜、南瓜等；茄科的茄子、番茄、辣椒、马铃薯、烟草、龙葵等；十字花科的白菜、萝卜、芥菜、青菜、花椰菜、甘蓝等；豆科的黄豆、菜豆、蚕豆、豌豆、木豆、羽扇豆等；菊科的芍药、秋菊、万寿菊等；锦葵科的棉花，大戟科的蓖麻等。美洲斑潜蝇成虫和幼虫均可造成危害。雌成虫常以产卵器刺入表面叶肉，形成扇形或筒形刺伤点，取食汁液后产卵或丢弃而形成小型失水枯斑。低龄幼虫潜入叶片、叶柄中取食为害，在叶的上表皮多蛀成弯弯曲曲的白色虫道，通常每片叶中可有几头甚至十几头幼虫为害，随着幼虫龄期的增大，虫道逐渐加长增粗，被害叶片因失绿而成白色。受害叶片叶绿素被破坏，影响光合作用。受害严重时叶片脱落，造成花芽、果实被灼伤，严重的造成毁苗。如一棚盛瓜期的西葫芦可在发现虫害后的14～15天内被毁灭；长径20cm以上的瓜叶，可在一周左右被吃尽叶肉，仅留上下表皮，之后，幼虫还可钻入叶柄甚至茎杆等部位为害，使幼苗折断，植株枯萎。观赏植物的叶片被害后出现难看的虫道和取食后枯斑，降低其观赏价值和经济价值。幼苗被害会延迟生长，导致作物减产。此外，美洲斑潜蝇还可传播植物病害。由于该虫寄主范围广、繁殖能力强、发育周期短、世代重叠、幼虫潜叶为害，是危害茄果类、瓜类、豆类及叶菜类蔬菜、观赏植物、饲料作物等的一种毁灭性害虫。例如，在美国佛罗里达洲，由于美洲斑潜蝇的严重为害，曾使番茄的产量显著减产；在加州，仅菊花业1981～1985年的损失就有9300万美元。在我国南京由于该虫为害致使作物减产30～50％，严重地块毁耕毁种，损失惨重；每年我国因美洲斑潜蝇危害所造成的直接经济损失高达25亿元，给我国的农业生产和“菜篮子工程”建设构成了严重威胁。

美洲斑潜蝇原产于巴西，20世纪40年代以来陆续爆发于美国佛罗里达、夏威夷等地，70年代后又发现于大洋洲的一些岛屿和阿拉伯半岛南部地区。多年来该虫随寄主植物及其它介质在世界范围内传播蔓延，现已在30多个国家和地区严重发生，许多国家将该虫列为一类危险的检疫性害虫。我国于1993年12月在海南省三亚市首次发现美洲斑潜蝇的发生与为害；1994年便在华南、华中地区普遍发生，1997年已蔓延至全国25个省/直辖市/自治区，到2000年已查明28个省/直辖市/自治区有不同程度的发生。目前我国除西藏地区尚未确定有美洲斑潜蝇发生外，其它省(自治区、直辖市)均有不同程度的发生和危害，对我国的出口贸易造成了严重威胁，因此加强对美洲斑潜蝇的检疫和监测，是维护我国对外贸易信誉，保障人民健康生活的必要前提。

美洲斑潜蝇成虫为小型蝇类，体长为1.3～2.3mm；卵长0.2～0.3mm，淡黄白色，半透明，肉眼无法发现。成虫将卵产在寄主植物组织中，幼虫潜入叶内在叶片栅栏组织取食为害，老熟后爬出虫道弹落地面在表土层化蛹。而加强检疫和监测必需建立一套快速准确的分子检测方法。目前国际上用于美洲斑潜蝇鉴定的方法主要有：1)形态特征鉴定；2)同工异构酶电泳法；3)PCR技术等。但目前国内针对美洲斑潜蝇尚没有标准的检测方法。