[发明专利]厚革质叶片石蜡切片方法

权利要求书

1.厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于包括以下步骤：

1)将叶片沿主脉两侧切开，将中央有叶脉的部分再横切成小段；

2)将步骤1)所得到的叶片用固定剂固定；

3)将步骤2)用固定剂固定的叶片脱水；

4)用二甲苯和乙醇的不同体积比的溶液作过渡，每级2～4h，具体过程为二甲苯∶100％乙醇为1∶2溶液中浸泡2～4h→二甲苯∶100％乙醇为1∶1溶液中浸泡2～4h→二甲苯∶100％乙醇为2∶1溶液中浸泡2～4h→纯二甲苯中浸泡2～4h→纯二甲苯中浸泡2～4h；

5)透蜡和包埋：透蜡采用熔点为52～54℃的软蜡，按体积比，二甲苯∶石蜡为1∶1溶液于37～40℃恒温箱中过渡浸蜡48～72h，之后换成纯石蜡于60～63℃恒温箱中浸蜡，期间要换1或2次纯石蜡，透蜡后用硫酸纸，3张为一个厚度，折2cm×2cm×3cm大的纸盒，用于包埋；

6)切片后展片，再贴片，然后烤片；

7)脱蜡复水；

8)染色后封片。

2.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤1)中，所述将叶片沿主脉两侧切开，是用单面刀片沿主脉两侧各5～6mm处切开；所述小段的长度为5～6mm。

3.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤2)中，所述固定剂为万能固定液，配方为70％乙醇90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml；所述固定的时间至少24h。

4.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤3)中，所述脱水的具体方法为：以60％乙醇开始，5％递增，每级3～5h，具体为60％乙醇3～5h→65％乙醇中3～5h→70％乙醇中3～5h→75％乙醇中3～5h→80％乙醇中3～5h→85％乙醇中3～5h→90％乙醇中3～5h→95％乙醇中3～5h→100％乙醇3～5h→100％乙醇3～5h。

5.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤6)中，所述切片采用生物切片机切片，切片的厚度为10～12μm。

6.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤6)中，所述展片是先在25％～35％乙醇过渡，然后在水温为48～55℃中的温水中展片。

7.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤6)中，所述贴片是直接用乙醇灯外焰轻微烘片。

8.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤6)中，所述烤片是于35～39℃的温箱内烤片24～36h。

9.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤7)中，所述脱蜡复水的具体方法为：按体积比，100％乙醇∶二甲苯为1∶2溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯为1∶1溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯为2∶1溶液中1～2min→100％乙醇1～2min→100％乙醇1～2min→95％乙醇1～2min→85％乙醇1～2min→70％乙醇1～2min→50％乙醇1～2min。

10.如权利要求1所述的厚革质叶片石蜡切片方法，其特征在于在步骤8)中，所述染色的具体方法为：1％番红溶液染色2～4h→95％乙醇1～2min→100％乙醇1～2min→100％乙醇1～2min→100％乙醇∶二甲苯为2∶1溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯为1∶1溶液中1～2min→100％乙醇∶二甲苯为1∶2溶液中1～2min→二甲苯10～15min→二甲苯10～15min→1％固绿复染35～45s；所述封片采用加拿大树胶或透明指甲油进行封片。