[发明专利]用于核苷合成的热稳定生物催化剂结合物

权利要求书

1.一种重组表达载体，包含：a）编码嘌呤核苷磷酸化酶（PNPase,E.C.2.4.2.1）的序列，b）编码尿苷磷酸化酶（UPase,E.C.2.4.2.3）的序列，c）或者前述两者；所述序列中的每一个可操作地连接于指导在合适的表达宿主中产生所述磷酸化酶的一个或多个控制序列；所述序列源自于古菌热变形菌纲，其特征在于PNPase来自硫磺矿硫化叶菌（Sulfolobus solfataricus）（SEQ ID NO.7），UPase来自敏捷气热菌（Aeropyrum pernix）（SEQ ID NO.8）。

2.一种宿主细胞，包含权利要求1的重组表达载体。

3.权利要求2的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。

4.权利要求2-3任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞是裂解物的形式。

5.一种在存在磷酸离子时在供糖核苷和受体碱基之间的转糖基方法，其特征在于所述方法包括使用敏捷气热菌的尿苷磷酸化酶（UPase）（NC_000854.2）、硫磺矿硫化叶菌的嘌呤核苷磷酸化酶（PNPase）（NC_002754.1）或它们的结合物。

6.权利要求5的转糖基方法，其中所述敏捷气热菌的UPase和所述硫磺矿硫化叶菌的PNPase由权利要求2-4任一项的宿主细胞提供。

7.权利要求5-6任一项的转糖基方法，其中所得到的产物是活性药物成分（API）或其中间体。

8.权利要求5-7任一项的转糖基方法，其中所述供糖核苷选自包含D-核糖或2'-脱氧核糖的天然的核苷或修饰的核苷；包含2'、3'和/或5'位修饰的核糖基团的核苷；以及其中糖是β-D-阿拉伯糖、α-L-木糖、3'-脱氧核糖、3',5'-双脱氧核糖、2',3'-双脱氧核糖、5'-脱氧核糖、2',5'-双脱氧核糖、2'-氨基-2'-脱氧核糖、3'-氨基-3'-脱氧核糖，或者2'-氟-2'-脱氧核糖的核苷。

9.权利要求5-8任一项的转糖基方法，其中所述受体碱基选自天然的或取代的嘧啶和嘌呤碱基；在1、2和6位中有一个或多个被取代的嘌呤碱基；在3和5位中有一个或多个被取代的嘧啶碱基；以及嘌呤、2-氮杂嘌呤、8-氮杂嘌呤、1-脱氮嘌呤（咪唑并吡啶）、3-脱氮嘌呤、7-脱氮嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、5-氟尿嘧啶、5-三氟甲基尿嘧啶、反式玉米素、2-氯-6-甲氨基嘌呤、6-二甲氨基嘌呤、6-巯基嘌呤。

10.权利要求5-9任一项的转糖基方法，其中所述方法在60℃和100℃之间进行。

11.权利要求5-10任一项的转糖基方法，其中所述方法在水性介质或者在非质子极性共溶剂体系中进行。

12.权利要求11的转糖基方法，其中所述非质子极性共溶剂体系选自二甲基亚砜、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃和二甲基甲酰胺。

13.权利要求5-12任一项的转糖基方法，其中所述供糖核苷选自尿苷和2’-脱氧尿苷，所述受体碱基选自2,6-二氨基嘌呤、5-氟尿嘧啶、5-三氟甲基尿嘧啶、反式玉米素、2-氯-6-甲氨基嘌呤、6-二甲氨基嘌呤和6-巯基嘌呤。