[发明专利]基因组编辑方法

权利要求书

1.一种编辑染色体序列的方法，所述方法包括：

(a)向包含所述染色体序列的细胞中引入至少一种编码识别所述染色体序列中的靶序列且能够裂解所述染色体序列中的裂解位点的锌指核酸酶的核酸，和任选的

(i)至少一种包含供整合的供体序列、上游序列和下游序列的供体多核苷酸，其中所述供体序列的两侧为所述上游序列和所述下游序列，并且其中所述上游序列和所述下游序列与所述裂解位点的任一侧具有显著的序列同一性，或

(ii)至少一种交换多核苷酸，其包含与所述染色体序列的位于所述裂解位点的一部分基本上同一且进一步包含至少一个核苷酸变化的交换序列；和

(b)培养所述细胞以允许表达所述锌指核酸酶，以使得所述锌指核酸酶将双链断裂在所述裂解位点引入所述染色体序列，并且其中所述双链断裂由以下过程修复：

(i)非同源末端连接修复过程，以使得将突变引入所述染色体序列，或任选的

(ii)同源介导修复过程，以使得将所述供体序列整合到所述染色体序列中或使所述交换序列与所述染色体序列的一部分交换。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是胚胎。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述胚胎是单细胞胚胎。

4.根据权利要求1所述的方法，其中将一种以上编码锌指核酸酶的核酸引入所述细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述编码锌指核酸酶的核酸是RNA。

6.根据权利要求5所述的方法，其中对所述RNA进行加帽。

7.根据权利要求5所述的方法，其中对所述RNA进行多腺苷酸化。

8.根据权利要求1所述的方法，其中将选自所述供体多核苷酸、所述交换多核苷酸或其任何组合的一种以上多核苷酸引入所述细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是培养细胞、原代细胞或干细胞。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是人细胞、哺乳动物细胞、脊椎动物细胞、无脊椎动物细胞或真菌细胞。

11.一种非人动物，所述动物由根据权利要求1所述的方法产生。

12.根据权利要求11所述的非人动物，其中所述动物是啮齿类动物。

13.根据权利要求11所述的非人动物，其中所述动物是家畜动物。

14.根据权利要求11所述的非人动物，其中所述动物是伴侣动物。

15.一种细胞，所述细胞由使用根据权利要求1所述的方法产生。

16.根据权利要求15所述的细胞，其中所述细胞是胚胎。

17.根据权利要求16所述的细胞，其中所述胚胎是单细胞胚胎。

18.根据权利要求15所述的细胞，其中所述细胞是培养细胞、原代细胞或干细胞。

19.一种胚胎，所述胚胎包含至少一种编码识别所述染色体序列中的靶序列且能够裂解所述染色体序列中的裂解位点的锌指核酸酶的核酸，和任选的

(i)至少一种包含供整合的供体序列、上游序列和下游序列的供体多核苷酸，其中所述供体序列的两侧为所述上游序列和所述下游序列，并且其中所述上游序列和所述下游序列与所述裂解位点的任一侧具有显著的序列同一性，或

(ii)至少一种交换多核苷酸，其包含与所述染色体序列的位于所述裂解位点的一部分基本上同一且进一步包含至少一个核苷酸变化的交换序列。

20.根据权利要求19所述的胚胎，其中所述胚胎是单细胞胚胎。