[发明专利]双特异性、四价抗原结合蛋白

权利要求书

1.一种双特异性、四价抗原结合蛋白，其包含：

a)第一抗体的经修饰的重链，

所述第一抗体特异性结合第一抗原，

且另外将所述第一抗体的VH-CH1域经由其N端融合至所述重链的C端；

b)a)的所述第一抗体的两条轻链；

c)第二抗体的经修饰的重链，

所述第二抗体特异性结合第二抗原，

其中CH1域被所述第二抗体的CL域替换，且另外将所述第二抗体的VH-CL域经由其N端融合至所述重链的C端；和

d)c)的所述第二抗体的两条经修饰的轻链，

其中CL域被所述第二抗体的CH1域替换。

2.依照权利要求1的抗原结合蛋白，其特征在于：a)的抗体的经修饰的重链的CH3域和c)的抗体的经修饰的重链的CH3域各自在包括所述抗体CH3域间的初始界面的界面处相遇；

其中改变所述界面以促进所述双特异性、四价抗原结合蛋白的形成，其中所述改变的特征在于：

i)改变一条重链的CH3域，

使得在一条重链的CH3域中与所述双特异性、四价抗原结合蛋白内的另一条重链的CH3域的初始界面相遇的初始界面内，

氨基酸残基用具有较大侧链体积的氨基酸残基替换，由此在一条重链的CH3域的界面内产生突出，该突出可位于另一条重链的CH3域的界面内的穴中，

并

ii)改变另一条重链的CH3域，

使得在第二CH3域中与所述双特异性、四价抗原结合蛋白内的第一CH3域的初始界面相遇的初始界面内，

氨基酸残基被具有较小侧链体积的氨基酸残基替换，由此在第二CH3域的界面内产生穴，第一CH3域的界面内的突出可位于该穴内。

3.依照权利要求2的抗原结合蛋白，其特征在于：

所述具有较大侧链体积的氨基酸残基选自下组：精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)，且

所述具有较小侧链体积的氨基酸残基选自下组：丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、缬氨酸(V)。

4.依照权利要求2或3的抗原结合蛋白，其特征在于：通过引入半胱氨酸(C)作为每个CH3域的相应位置中的氨基酸，使得可以形成这两个CH3域间的二硫桥来进一步改变这两个CH3域。

5.一种用于制备依照权利要求1至4的双特异性、四价抗原结合蛋白的方法，包括下列步骤：

a)用包含编码依照权利要求1至4的双特异性、四价抗原结合蛋白的核酸分子的载体转化宿主细胞，

b)在容许所述抗原结合蛋白分子合成的条件下培养所述宿主细胞；并

c)自所述培养物回收所述抗原结合蛋白分子。

6.包含依照权利要求5的载体的宿主细胞。

7.一种药物组合物，其包含依照权利要求1至4的双特异性、四价抗原结合蛋白和至少一种药学可接受赋形剂。

8.依照权利要求1至4的双特异性、四价抗原结合蛋白，其用于治疗癌症。

9.依照权利要求1至4的双特异性、四价抗原结合蛋白在制造用于治疗癌症的药物中的用途。

10.一种用于治疗需要治疗的患者的方法，其特征在于对所述患者施用治疗有效量的依照权利要求1至4的双特异性、四价抗原结合蛋白。