[发明专利]用二价盐和磷酸盐进行絮凝

说明书

技术领域

本发明涉及简单和非常有效的用于从发酵液絮凝细菌细胞，产生目标蛋白的方法。

背景技术

当需要具有非常高纯度的蛋白时，例如当蛋白待用于药物领域时，需要非常有效的絮凝过程。

许多已知的絮凝剂是无法使用的，因为它们可能在最终医药产品中成为杂质。

因此，本发明的目的是对上述问题提供简单而有效的解决方案。

发明内容

发明人发现可以以非常有效的方式从发酵液絮凝细菌细胞，产生目标蛋白，即，使用二价盐和磷酸盐的组合，因此我们要求保护：

一种从发酵液絮凝细菌细胞，产生目标蛋白的方法，包括：

a)用水将发酵液稀释至1000％(w/w)；

b)添加二价盐至其在发酵液中的浓度为高于10毫摩尔每升稀释的发酵液；

c)调整磷酸根浓度至其在发酵液中的浓度为高于10毫摩尔每升稀释的发酵液；

d)调整发酵液的pH至范围为6.1-10.5的pH；和

e)去除细菌细胞，由此获得具有少于100NTU的浊度的蛋白溶液。

具体实施方式

本发明涉及简单的和非常有效的从发酵液絮凝细菌细胞，产生目标蛋白的方法，包括添加二价盐和磷酸盐，在此之后去除细菌细胞并获得具有非常低浊度的蛋白溶液。

细菌细胞

细菌细胞可为芽孢杆菌属(Bacillus)细胞，例如，选自下组的芽孢杆菌属细胞：嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短芽孢杆菌(Bacillus brevis)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)、坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus lichenuformis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)；优选为迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌细胞；特别是地衣芽孢杆菌细胞。

在另一个实施方案中，所述细菌细胞可为大肠杆菌(E.coli)细胞，或假单胞菌属菌种(Pseudomonas sp.)细胞，或链霉菌属菌种(Streptomyces sp.)细胞，特别是鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)细胞或酸性疮痂链霉菌(Streptomyces acidiscabies)细胞。

目标蛋白

根据本发明，所述目标蛋白可为肽或多肽。

根据本发明，优选的肽含有5至100个氨基酸；优选10至80个氨基酸；更优选15至60个氨基酸。根据本发明，优选的待回收的肽为甜味蛋白(brazzein)。

优选的多肽可为任何可由细菌细胞产生的蛋白。所述蛋白可为胰岛素、thaxomin、白蛋白或酶。

在一个优选实施方案中，目标蛋白是待用于药物的酶。

在一个优选实施方案中，将所述方法施用于水解酶(根据Enzyme Nomenclature；Recommendaions of the Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry为类型EC3)。

在一个特别优选的实施方案中，选自下组的酶是优选的：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、和纤维素酶：