[发明专利]以脂肪醇形成酰基CoA还原酶(FAR)产生脂肪醇

权利要求书

1.一种产生脂肪醇组合物的方法，所述方法包括：

a)在适宜的培养基中培养重组微生物，其中所述重组微生物包括编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：14或其功能片段具有至少75％序列同一性(至少80％、至少85％、至少90％、和至少95％序列同一性)的异源脂肪酰还原酶(FAR)酶的基因，并

b)允许所述基因的表达，其中所述表达导致脂肪醇组合物的产生。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述FAR酶与SEQ ID NO：2或其功能片段具有至少85％序列同一性(至少90％和至少95％序列同一性)。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述FAR酶与SEQ ID NO：6或其功能片段具有至少85％序列同一性(至少90％和至少95％序列同一性)。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述FAR酶与SEQ ID NO：14或其功能片段具有至少85％序列同一性(至少90％和至少95％序列同一性)。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述FAR酶包括SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：14或其功能片段的序列。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述FAR酶由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：14或其功能片段的序列组成。

7.一种产生脂肪醇组合物的方法，所述方法包括：

a)在适宜的培养基中培养重组微生物，其中所述重组微生物包括编码与SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：14或其功能片段具有至少30％序列同一性的异源脂肪酰还原酶(FAR)酶的基因，并

b)允许所述基因的表达，其中所述表达导致脂肪醇组合物的产生。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所产生的脂肪醇包括C12-C18脂肪醇。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所产生的脂肪醇包括C14:0脂肪醇、C16:0脂肪醇、C18:0脂肪醇、C16:1脂肪醇和C18:1脂肪醇中的至少两种的混合物。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所产生的脂肪醇的至少25％是被分泌的。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所产生的脂肪醇的至少50％是被分泌的。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述重组微生物产生至少0.5g/L的脂肪醇。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述重组微生物产生至少5g/L的脂肪醇。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述重组微生物产生至少15g/L的脂肪醇。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述重组微生物是细菌、酵母、丝状真菌或藻类。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述重组微生物是大肠杆菌(E.coli)。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述重组大肠杆菌还包括失活的或沉默的内源脂肪酰ACP硫酯酶基因、失活的或沉默的内源脂肪酰CoA合成酶基因或二者均包括。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述酵母是耶罗威亚酵母属(Yarrowia)、假丝酵母属(Candida)、毕赤酵母属(Pichia)或酵母属(Saccharomyces)的菌株。

19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，所述方法还包括分离所述脂肪醇组合物。

20.一种组合物，所述组合物包括根据权利要求19所述的方法产生的分离的脂肪醇。

21.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中编码FAR的所述基因包括密码子优化的核酸序列。