[发明专利]基因毒性测试

权利要求书

1.一种表达盒，包含编码Gaussia萤光素酶(GLuc)报道蛋白及其衍生物的DNA序列，该DNA序列可操作地连接于人GADD45α基因启动子和人GADD45α基因调节元件，其配置为响应基因组损伤激活所述编码Gaussia萤光素酶(GLuc)报道蛋白的DNA序列的表达。

2.权利要求1的表达盒，其中所述调节元件包含GADD45α基因的外显子1、外显子2、外显子3和/或外显子4，或至少其部分区，或其任意组合。

3.权利要求2的表达盒，其中所述调节元件包含GADD45α基因的外显子1的至少部分区，GADD45α基因的外显子3的至少部分区和GADD45α基因的外显子4的至少部分区。

4.前述任一项权利要求的表达盒，其中所述调节元件包含GADD45α基因的内含子1、内含子2和/或内含子3，或至少其部分区，或其任意组合。

5.权利要求4的表达盒，其中所述调节元件包含GADD45α基因的内含子3的至少部分区。

6.权利要求5的表达盒，其中所述调节元件包含推定的p53结合基序。

7.权利要求5或权利要求6的表达盒，其中所述调节元件包含推定的AP-1基序。

8.前述任一项权利要求的表达盒，其中所述基因组损伤是DNA损伤。

9.前述任一项权利要求的表达盒，其中编码Gaussia萤光素酶(GLuc)的DNA序列示于SEQ ID NO：1的2641-3198位。

10.一种表达盒GD532-GLuc，其基本上如图2所示并提供于SEQ ID NO：2。

11.一种重组载体，其包含权利要求1-10任一项所述的表达盒。

12.一种重组载体pEP-GD532-GLuc，基本上如图2所示并提供于SEQ ID NO：1。

13.一种细胞，包含权利要求1-10任一项所述的表达盒或权利要求11或12任一项所述的重组载体。

14.权利要求13的细胞，其中所述细胞为人细胞。

15.权利要求14的细胞，其中所述细胞为具有完整功能性p53的人细胞。

16.权利要求15的细胞，其中所述细胞为TK6人细胞系。

17.一种检测导致或加剧基因组损伤的试剂的存在的方法，包括对权利要求13-16任一项所述的细胞施以试剂；和监测来自该细胞的GLuc报道蛋白的表达。

18.权利要求17的方法，其中进一步筛选所述试剂以评估将活生物暴露于该试剂是否安全。

19.权利要求17或权利要求18的方法，其中所述试剂是候选的药物、食物添加剂或化妆品。

20.权利要求17-19任一项所述的方法，包括制备权利要求13-16的细胞的群体，或用权利要求11或12的重组载体转染的细胞，将所述细胞与所述试剂温育预定的时间，并直接从所述细胞的样品监测GLuc报道蛋白的表达。

21.权利要求20的方法，其中所述方法是在S9肝脏提取物存在下进行的。

22.权利要求21的方法，其中所述群体中的细胞的密度是使用细胞染料确定的。

23.权利要求22的方法，其中所述细胞染料是花青染料。

24.权利要求23的方法，其中所述花青染料是噻唑橙。

25.权利要求17-24任一项所述的方法，其中GLuc报道蛋白的表达是从暴露于测试化合物起46至50小时之后进行监测的。