[发明专利]抗硫苷脂和抗硫酸化蛋白聚糖抗体及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及特异性地并以高亲和力识别硫苷脂和硫酸化蛋白聚糖的新的单克隆抗体(MAb)。本发明还涉及包含本发明的单克隆抗体或衍生自这些抗体的片段的药物组合物。另外，本发明涉及用于诊断心血管疾病的试剂盒，其包含本发明的抗体或其片段。

背景技术

在用于获得鼠MAb的杂交瘤技术(Koehler y Milstein Nature，256：495-497，1975)发展了30多年以后，已经证明其在疾病诊断和基础研究中是非常有用的，但是仅注册了20种用于人类治疗的抗体(Pharma Vitae，Monoclonal Abs Update，6-363，2008)。这很大程度是由于它们在血液中的半衰期短、人类免疫系统对鼠效应子功能的识别差，以及，当把这些抗体注射进入患者时，由于它们的鼠源性而引发的免疫应答(HAMA应答，“人抗-小鼠抗体”的英文首字母简略词)。数项研究已经证明：在施用外来抗体之后，患者中产生的免疫应答可能相当之强，并且能够实质上消除该抗体在最初治疗之后的治疗功用。此外，根据Khazaeli，M.B.y col.Journal of Immunotherapy 15：42-52(1994)的报告，在给予患者鼠MAb之后，随后以不相关的鼠抗体进行的治疗可能是无效的，甚至是有危险的，这是由于交叉反应性的HAMA应答。从以上信息可以看出，有必要获得在人体中免疫原性较低的形式的治疗性抗体，其可以容易地且经济地获得，并且它们适合于制备治疗性制剂和其它用途。Morrison S.L.y col.Adv Immunol.，44：65-92(1989)。

已经开发了数种方法以从小鼠或大鼠人源化抗体，因此减小当注射入人体时针对这些外来蛋白的异种应答。最初的减小免疫原性的尝试之一是产生“嵌合”抗体，其中鼠蛋白的可变域被连接至人类分子的恒定域，不仅实现了降低的免疫原性，而且实现了免疫效应子功能的激活。Morrison S.L.y col.PNAS USA，81：6851-6855(1984)。这些嵌合分子保持了与抗原结合相关的原始抗体的特征，同时其恒定区是非免疫原性的。

动脉粥样硬化及其后果对于世界人民具有重大影响，从数年前开始，其为发达国家(Melián，A.y col.Am.J.Pathol.，155：775，1999)和古巴(OMS，2004，Anuario Estadístico，MINSAP，2007)发病率和死亡率的主要诱因。动脉粥样硬化是多因素性质的慢性炎性疾病，其大大促成心肌和脑梗塞的发病、坏疽和肢体功能丧失。Greaves，D.R.y col.Trends Immunol 22：180-181(2001)；Ross，R.y col.Am Heart J 138(5Pt2)：S419-20(1999)。动脉粥样硬化的主要诱因之一是高胆固醇血症。通过与蛋白聚糖的相互作用，低分子量脂蛋白(LDL)穿过动脉壁的运输被阻塞在动脉内膜的细胞外基质中，并发生氧化修饰。结合于动脉内膜的蛋白聚糖的脂蛋白更易于在脂和蛋白部分发生变化，例如氧化和酶促水解，这会增加它们的致动脉粥样化的潜在性。ApoB-100含有数个区域，通过所述区域其能够结合至蛋白聚糖的糖胺聚糖链，所述区域共同之处在于存在多个碱性氨基酸。Camejo，G.，E.y col.Atherosclerosis 139：205-22，(1998)；Chang，T.Y.y col.Curr Opin Lipidol12：289-96(2001)；Camejo，G.，U.y col.Atheroscler Suppl3：3-9(2002)。糖胺聚糖上的负电荷的密度影响其与LDL的相互作用，硫酸化程度影响LDL与蛋白聚糖的相互作用。Sambandam T.y col.Arterioascler Thromb，11：561-568(1991)。

此外，氧化的LDL能够通过巨噬细胞表面上的清道夫受体被巨噬细胞内化，这导致细胞内胆固醇的积累，随后形成泡沫细胞。这些事件代表了启动免疫应答的主要步骤，其中涉及单核细胞/巨噬细胞、肥大细胞、树突细胞、T细胞和NKT。Camejo，G.y col.Atherosclerosis139(2)：205-22(1998)；Hurt-Camejo，E.y col.Invest Clin 42Suppl1：43-73(2001)；Skalen，K.，M.y col.Nature 417：750-754(2002)。