[实用新型]一步法快速联检IrrE和BT蛋白的试剂盒

说明书

技术领域：

本实用新型涉及一步法快速联检IrrE和BT蛋白的试剂盒。

背景技术：

在转基因植物的研制开发或在对转基因产品进行筛选或安全性评价时，往往需要对转入的外源性基因进行定性或半定量测定。

1.IrrE蛋白编码基因(irrE)是具有极端辐射抗性的耐辐射球菌Deinococcusradiodurans中的全局调控因子，irrE基因的表达能显著增强大肠杆菌的辐射抗性、氧化抗性和耐盐能力。该基因导入植物后，明显提高了植物的耐盐和抗旱能力。目前，IrrE蛋白编码基因已转入玉米、棉花、烟草、油菜等作物。

2.苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是世界上应用范围最广的杀虫微生物，杀虫BT晶体蛋白的作用方式主要通过Cry1类蛋白作用于鳞翅目害虫。

目前，IrrE蛋白编码基因以及Cry1类蛋白编码基因已转入玉米、棉花、烟草、油菜等作物。在转基因产品进行筛选和安全性评价过程中，需要对植物样本进行简便有效的检测。但是，现有的检测技术如酶免、放免等方法，受仪器(酶标仪、放免闪烁仪、离心机等)、场地等因素的限制，而且检测时间长(酶免检测时间需20hr、放免需30min～1hr)，检测成本较高，很难推广应用。

以往试纸条检测的方法虽可部分克服以上不足(如美国EnviroLogixIncorporated，Strategic Diagnostics，Inc.和重庆金标生物技术有限公司生产的试纸条)，但每种试纸条只能检测转基因作物中单一的外源基因，实际操作中容易产生错误结果。例如：如果检测者仅有IrrE检测试纸条，而检测对象中并未转入irrE基因，而是转入BT cry1Ac基因，那么很可能会得出检测对象不存在外源基因的错误结果，造成不必要的损失。

因此，实践中急需有一种可同时检测转基因植物中IrrE蛋白和Bt晶体蛋白，且操作简便、结果准确可靠、快速的装置。

实用新型内容：

本实用新型的目的是建立一种操作简便、结果准确可靠、快速，并能同时检测两种不同转基因成分(IrrE和BT蛋白)的免疫检测试剂盒。

本实用新型的技术方案是这样的：它包括底板和上盖，底板盖入上盖后组成试剂盒，其特征在于底板上放置有两条测试带；上盖有两个观测窗和两个加样孔。

底板的上表面可以设置两条凹槽，每条凹槽内嵌入一条测试带，底板的厚度不限。

所述底板或上盖可具有卡槽，以保证底板与上盖扣紧。

所述观测窗优选是长方形。

试剂盒的形似扁平的菱形盒。

所述底板内的两条测试带，一条用于检测IrrE，另一条用于检测BT-Cry1Ac蛋白。所述测试带是一种具有检测系统主体膜反应体系功能的检测材料，由高分子纤维膜、塑料等多层材料制成。两种蛋白的测试带均可分为质控区和检测区，质控区可包被羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG多克隆抗体；IrrE蛋白测试带的样品检测区包被特异功能性IrrE，BT-Cry1Ac蛋白测试带的样品检测区包被BT-Cry1Ac的单克隆抗体或多克隆抗体。

当外源基因转入植物，并在植物中表达，将产生目的蛋白(IrrE和BT)，因此通过检测样品中是否含有上述两种蛋白来确定该基因是否存在。如果外源基因转入植物，发生基因沉默，无目的蛋白产生，将不能达到预期目的(耐盐或杀虫)。

本实用新型的目的是这样实现的：当底板盖入上盖后，每个观测窗和加样孔各分别对应一条测试带，通过盒盖上的加样孔和观测窗可进行加样和观察检测结果，每个观测窗可分别检查一种基因。

每个观测窗分为测试区(T)和质控区(C)两部分，可在上盖上用字母C、T标示出；

检测时，将送检物品的同一种提取液分别滴加在试剂盒的两个加样孔中，3-5分钟后，通过肉眼就可以通过上盖的观测窗直接观察到准确的检测结果。

对于每个观测窗来说，用以下方式判断检测结果：

1、阴性(-)：

反应状况：观测窗质控区(C)出现一条紫红色条带。

检测结果：待检样品中不含待检基因或其含量在其阈值以下。

2、阳性(+)：

反应状况：观测窗质控区(C)出现一条紫红色条带，在测试区(T)内同时出现紫红色条带。检测结果：待检基因含量在阈值以上。

3、无效：

反应状况：质控区(C)未出现紫红色条带，

检测结果：表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。

本实用新型所述试剂盒的优点在于：