[发明专利]一种重组腺病毒及其构建方法无效
| 申请号： | 201010614032.2 | 申请日： | 2010-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN102154225A | 公开（公告）日： | 2011-08-17 |
| 发明（设计）人： | 孙永科;杨玉艾;张建国;段纲;张应国;李文春;张文东;李红炳;周建国;吴全君 | 申请（专利权）人： | 云南生物制药有限公司;云南农业大学;云南省动物疫病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/40;C12N15/861 |
| 代理公司： | 昆明正原专利代理有限责任公司 53100 | 代理人： | 徐玲菊 |
| 地址： | 650101 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 病毒 及其 构建 方法 | ||
1.一种重组腺病毒，其特征在于在腺病毒的CMV启动子下游多克隆位点Bgl II和SalI酶切位点中插入猪瘟病毒E2基因，在腺病毒的CMV启动子下游Kpn I和NotI酶切位点中插入蓝耳病病毒GP5基因。
2.一种构建如权利要求1所述的重组腺病毒的方法，其特征在于包括下列构建步骤：
A.从市购的猪瘟病毒和蓝耳病病毒中分别扩增出E2和GP5基因；
B.将步骤A获得的猪瘟病毒E2基因通过Bgl II和Sal I酶切位点插入至腺病毒穿梭载体pAdTrack中，形成腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2；
C.将步骤A获得的蓝耳病病毒GP5基因通过Kpn I和Not I酶切位点插入至腺病毒穿梭载体pAdTrack中，形成腺病毒穿梭载体pAdTrack-GP5；
D.将步骤C的腺病毒穿梭载体pAdTrack-GP5按常规的PCR方法扩增出含有CMV启动子的CMV-GP5基因，通过Xhol I和Xba I酶切位点插入至步骤B的腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2中的Xhol I和Xba I酶切位点中，形成重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2-CMV-GP5；
E.将步骤D的重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-E2-CMV-GP5经Pme I酶切线性化后，转化到含有腺病毒骨架载体pAd-easy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中，形成重组腺病毒骨架载体pAd-easy-E2-CMV-GP5；
F.将重组腺病毒骨架载体pAd-easy-E2-CMV-GP5经Pac I线性化后，转染人胚胎肾细胞HEK2983中，包装出重组腺病毒rAd-E2-CMV-GP5。
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