[发明专利]一种提取鱼类粘孢子虫基因组DNA方法

权利要求书

1.一种提取粘孢子虫基因组DNA方法，包括如下步骤：

1)将权利要求6-9中任一所述方法得到的粘孢子虫孢子研磨成粉，加入提取液混匀，得到混合液；

2)向步骤1)的混合液中加入氯仿异戊醇混合液混匀、离心，收集上清液；

3)向步骤2)得到的上清液中加入氯仿异戊醇混合液混匀，离心，收集上清液；

4)向步骤3)得到的上清液中加入异丙醇混匀，静置，收集沉淀；

5)将步骤4)得到的沉淀依次进行漂洗、干燥、溶解、RNA消化，得到消化产物；

6)将步骤5)得到的消化产物依次用酚氯仿异戊醇混合液和氯仿异戊醇混合液进行抽提，离心、收集上清液；

7)向步骤6)得到的上清液中加入3MNaAc水溶液和无水乙醇混匀，静置，离心，收集沉淀，得到DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述提取液与所述粘孢子虫孢子的配比为(10ml-50ml)∶(1.5g-2g)，所述提取液与所述粘孢子虫孢子的配比具体为(10ml、40ml或50ml)∶(1.5g、1.8g或2g)；

步骤2)中，所述步骤1)的混合液和所述氯仿异戊醇混合液的体积比为1∶(1-2)，所述步骤1)的混合液和所述氯仿异戊醇混合液的体积比具体为1∶1、1∶1.5或1∶2；

步骤3)中，所述步骤2)的上清液和所述氯仿异戊醇混合液的体积比为1∶(1-2)，所述步骤2)的上清液和所述氯仿异戊醇混合液的体积比具体为1∶1、1∶1.5或1∶2；

步骤4)中，所述步骤3)得到的上清液和所述异丙醇的体积比为(1-3)∶(1-2)；所述步骤3)得到的上清液和所述异丙醇的体积比具体为1∶1、3∶2或3∶1；所述异丙醇的温度为-20℃；

步骤5)中，所述漂洗为依次用75％(体积百分含量)乙醇水溶液、75％(体积百分含量)乙醇水溶液和无水乙醇进行漂洗；

所述溶解的方法为用TE缓冲液溶解所述沉淀得到溶液A，

所述消化的方法为向所述溶液A中加入RNaseA得到消化产物，所述RNaseA加入量为20mg/l溶液A；

步骤6)包括如下步骤：A)将步骤5)得到的消化产物和是其1倍-3倍体积的酚氯仿异戊醇混合液混匀，离心，收集上清液A，

所述将步骤5)得到的消化产物和是其1倍-3倍体积的酚氯仿异戊醇混合液具体为将步骤5)得到的消化产物和是其1倍、2倍或3倍体积的酚氯仿异戊醇混合液；

B)将步骤A得到的上清液A和是其1倍-3倍体积的氯仿异戊醇混合液混匀，离心，收集上清液，

所述将步骤A)得到的上清液A和是其1倍-3倍体积的氯仿异戊醇混合液具体为将步骤A)得到的上清液A和是其1倍、2倍或3倍体积的氯仿异戊醇混合液；

步骤7)中，所述步骤6)得到的上清液、所述3MNaAc水溶液和所述无水乙醇的体积比为：1∶(0.05-0.2)∶(2-3)，具体为1∶(0.005、0.1或0.2)∶(2、2.5或3)。