[发明专利]一种重组人甲状旁腺激素的制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种重组人甲状旁腺激素的制备方法，尤其是PTH(1-34)可以提高成骨细胞活性和钙的吸收，促进骨生长和增加骨矿盐密度，可增加脊椎骨、非脊椎骨的骨矿盐密度，降低骨折的发生率，在医学上具有较大的应用价值。

【背景技术】

骨质疏松症是一种全身性骨代谢疾病，是老年人的常见病、多发病，随着社会老龄化，该病的发病率在不断上升，其发病率已跃居所有疾病的第七位。患有骨质疏松症的病人，具体表现为脊柱压缩、萎陷，身材变矮、脊柱后凸等，其生活自立能力下降，而且患者易骨折。而患者一旦骨折，不仅会给生活带来不便，还会危机到患者生命。因此，骨质疏松症的形势严峻，开发其新型的防治药物将具有广阔的市场前景。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题是提供一种重组人甲状旁腺激素的制备方法，它早期PTH是从牛甲状旁腺人工提取得到，但来源有限且过程烦琐，得率较低，分离难度也大，从而限制了PTH在临床上的应用。因此，需要有大量生产PTH的方法。最早采用化学合成的方法进行生产，但存在高成本、高风险等不利因素。随着分子生物学和基因工程重组技术的发展，重组基因工程技术以其成本低廉、风险性小而成为优先选择的方法。但是由于PTH不稳定，极易被蛋白酶降解，使得基因工程技术开发重组PTH难度较大，直接表达PTH基因的产量不超过0.5mg/l，难以得到大量的重组PTH产品。

为解决上述技术问题，本发明所采用技术方案是：为避免其降解，多采用融合蛋白的方法，在纯化到一定阶段进行酶切或化学降解来除去多余的融合蛋白[Uhlen M.，et al 1990]，但常由于位点的不均一性，导致在重组PTH的末端形成附加的氨基酸残基。为得到与天然PTH一级结构一致的重组PTH，需要在设计和工艺上进行改进。利用融合蛋白表达技术，全新设计新的酶切位点，表达PTH(1-34)，并经过在工艺方面进行修改，使得融合蛋白经过裂解后，重组PTH(1-34)的一级结构与天然的PTH(1-34)结构一致。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：进行重组PTH的临床前中试放大生产和动物试验研究，为其临床应用及产业化打下良好的基础，并为治疗骨质疏松症提供了新的治疗途径。该药的成功开发将带来明显的经济效益和社会效益。

【具体实施方式】

经过筛选出更高表达量和对后续工艺难度较小的工程菌后，进行小试工艺的放大和中试试验。小试工艺的放大主要在发酵条件和纯化工艺上进行。发酵条件的优化：一方面通过摇瓶试验摸索合适的培养条件，另一方面根据摇瓶结果进行小罐(10L)发酵，优化发酵参数，并结合纯化难度和收率、纯度等参数以获得更高表达量和纯化难度较小的工艺。