[发明专利]高产DL-3-苯乳酸乳酸菌菌株的筛选方法

权利要求书

1.高产DL-3-苯乳酸乳酸菌菌株的筛选方法，包括培养基的配置与样品前处理、HPLC对MRS发酵上清中DL-3-苯乳酸含量进行定性、定量检测。

2.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所说MRS发酵上清是用乳酸菌MRS发酵液4℃，6000rpm离心10min，取上清液过0.45μm滤膜而得。

3.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所述样品前处理为配制DL-3-苯乳酸标准贮备液和工作液：准确称取100±0.01mg DL-3-苯乳酸标准品，用甲醇溶解定容至100mL，即为1g/LDL-3-苯乳酸标准贮备液，于-4℃保存；吸取DL-3-苯乳酸标准贮备液，以甲醇为溶剂定容，配制浓度为0、60、100、200、400、600、800mg/L的DL-3-苯乳酸标准工作液。

4.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所述HPLC对MRS发酵上清中DL-3-苯乳酸含量定性检测是采用反相离子抑制技术，在流动相中加人0.5％磷酸V/V，抑制DL-3-苯乳酸解离，利用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱，使DL-3-苯乳酸与乳酸菌MRS发酵上清液中杂质分离，通过对比标样与乳酸菌MRS发酵上清中DL-3-苯乳酸的保留时间及光谱图进行DL-3-苯乳酸定性检测。

5.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所述HPLC对MRS发酵上清中DL-3-苯乳酸含量定量检测是将一系列已知浓度的DL-3-苯乳酸标准工作液进样分析，以DL-3-苯乳酸样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，并计算回归方程。

6.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于所说培养上清的配制采用乳酸菌MRS发酵液4℃，6000rpm离心10min，取上清液过0.45μm滤膜为乳酸菌MRS发酵上清；所说样品前处理为配制DL-3-苯乳酸标准贮备液和工作液：准确称取100±0.01mg DL-3-苯乳酸标准品，用甲醇溶解定容至100mL，即为1g/L DL-3-苯乳酸标准贮备液，于-4℃保存；吸取DL-3-苯乳酸标准贮备液，以甲醇为溶剂定容，配制浓度为0、60、100、200、400、600、800mg/L的DL-3-苯乳酸标准工作液；所说HPLC对MRS发酵上清中DL-3-苯乳酸含量定性检测是采用反相离子抑制技术，在流动相中加人0.5％磷酸V/V，抑制DL-3-苯乳酸解离，利用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱，使DL-3-苯乳酸与乳酸菌MRS发酵上清液中杂质分离，通过对比标样与乳酸菌MRS发酵上清中DL-3-苯乳酸的保留时间及光谱图进行DL-3-苯乳酸定性检测；所说HPLC对MRS发酵上清中DL-3-苯乳酸含量定量检测是将一系列已知浓度的DL-3-苯乳酸标准工作液进样分析，以DL-3-苯乳酸样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，并计算回归方程。

7.如权利要求1～6所述的筛选方法，其特征在于进一步对该筛选方法进行精密度、重复性、稳定性与加标回收率检测，所说精密度检测是取浓度分别为100、200、400mg/L的DL-3-苯乳酸标准工作液分别重复进样5次进行分析，并计算3个浓度对应的峰面积相对标准偏差；所说重复性和稳定性检测是在一个工作日内重复检测浓度分别为100、200、400mg/L的DL-3-苯乳酸标准工作液5次，并每隔24h对样品溶液进行检测，重复操作5次，并计算的峰面积相对标准偏差；加标回收率检测是将3个浓度梯度的DL-3-苯乳酸标准品加入浓度已知的乳酸菌MRS发酵上清培养上清液中，对其进行5次重复测定，并计算的峰面积相对标准偏差。