[发明专利]一种弓形虫检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测弓形虫的专用引物，由以下三对环介导等温扩增所用引物组成；一对引物是与弓形虫基因组中GenBank Accession Number AF146527基因结合的内侧引物对，一对引物是与弓形虫基因组中GenBank Accession Number AF146527基因结合的外侧引物对，一对引物是与弓形虫基因组中GenBank Accession Number AF146527基因结合的环形引物对。

2.如权利要求1所述的专用引物，其特征在于：所述内侧引物对由上游引物FIP和下游引物BIP组成，所述上游引物FIP的核苷酸序列是序列表中的序列4，所述下游引物BIP的核苷酸序列是序列表中的序列5；所述外侧引物对由上游引物F3和下游引物B3组成，所述上游引物F3的核苷酸序列是序列表中的序列2，所述下游引物B3的核苷酸序列是序列表中的序列3；所述环形引物对由上游引物LF和下游引物LB组成，所述上游引物LF的核苷酸序列是序列表中的序列6，所述下游引物LB的核苷酸序列是序列表中的序列7。

3.权利要求1或2所述的专用引物在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒用于检测待测样本中是否含有弓形虫和/或辅助鉴定弓形虫。

4.一种含有权利要求1或2所述的专用引物的试剂盒；所述试剂盒用于检测待测样本中是否含有弓形虫和/或辅助鉴定弓形虫。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括溶液B；所述溶液B由溶剂和溶质组成；所述溶剂为水；所述溶质及其浓度如下：所述上游引物F3为2.4-3.6pmol/μl，所述下游引物B3为2.4-3.6pmol/μl，所述上游引物FIP为20-28pmol/μl，所述下游引物BIP为20-28pmol/μl，所述上游引物LF为10-14pmol/μl，所述下游引物LB为10-14pmol/μl。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述溶液B中，所述上游引物F3为3pmol/μl，所述下游引物B3为3pmol/μl，所述上游引物FIP为24pmol/μl，所述下游引物BIP为24pmol/μl，所述上游引物LF为12pmol/μl，所述下游引物LB为12pmol/μl。

7.如权利要求4或5或6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括溶液A；所述溶液A由溶剂和溶质组成；所述溶剂为水；所述溶质及其浓度如下：KCl为16.67nmol/μl，MgSO₄·7H₂O为13.33nmol/μl，(NH₄)₂SO₄为16.67nmol/μl，钙黄绿素为0.083nmol/μl，MnCl₂·4H₂O为1nmol/μl，四种脱氧核苷酸各2.33nmol/μl，甜菜碱为0.33μmol/μl，1M pH8.8Tris-HCl为33.33nmol/μl，Tween-20为0.17％(体积百分含量)，Bst DNA聚合酶为0.80U/μl。

8.一种检测来自死亡动物的样品中是否携带弓形虫的方法，是用权利要求1或2所述专用引物对来自死亡动物的样品的总DNA进行环介导等温扩增反应，检测扩增产物，确定来自死亡动物的样品中是否携带弓形虫；所述环介导等温扩增反应的条件为：60-65℃、30-90min。

9.权利要求1或2所述专用引物或权利要求4至7中任一所述试剂盒在检测待测样本中是否含有弓形虫中的应用。

10.权利要求1或2所述专用引物或权利要求4至7中任一所述试剂盒在辅助鉴定弓形虫中的应用。