[发明专利]从微量人脂肪组织提取间充质干细胞及规模化培养的方法

权利要求书

1.一种从微量人脂肪组织提取间充质干细胞的方法，其特征为，主要包括如下步骤：(1)微创抽脂，注射利多卡因小面积的局部麻醉，利用微型吸引针无菌抽取患者微量脂肪组织；(2)脂肪间充质干细胞的提取，采用磷酸盐缓冲液浸泡、离心洗涤无菌获取的脂肪组织，用胶原酶消化，经梯度离心、过滤，随后在体外培养体系中进行培养。

2.根据权利要求1所述的从微量人脂肪组织提取间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤(1)中，抽取的脂肪组织为5ml。

3.根据权利要求1或2所述的从微量人脂肪组织提取间充质干细胞的方法，其特征在于：步骤(2)中，采用磷酸盐缓冲液浸泡，1500r/min离心洗涤脂肪至，用0.1％Ⅰ型胶原酶37℃水浴消化约30min，加磷酸缓冲液稀释胶原酶并离心，悬浮下层沉淀，100目滤网过滤，1500r/m离心10min，以去除悬浮的脂肪细胞及脂滴，弃上清液，随后进行体外培养。

4.根据权利要求1所述的间充质干细胞规模化培养的方法，其特征为，主要包括如下步骤：(1)原代培养，培养体系为STEMPRO MSCSFM无血清培养基，含有2mM/ml的谷氨酰胺和100U/ml的青-链霉素；(2)细胞鉴定，流式检测细胞表面抗原CD44和CD34的表达，体外分化实验检测脂肪间充质干细胞多向分化潜能，包括像脂肪细胞的分化和成骨细胞的分化；(3)规模化扩增，采用STEMPRO MSC SFM无血清培养体系，含有2mM/ml的谷氨酰胺、10ng/ml的血小板衍生生长因子、10ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子和0.5μg/ml的庆大霉素。