[发明专利]利用乳清粉生产酸性木聚糖酶的方法

权利要求书

1.利用乳清粉生产酸性木聚糖酶的方法，其特征在于，步骤如下：利用里氏木霉作为原始菌株，摇瓶培养菌种，一级种子培养，二级种子培养，发酵，一级过滤，二级过滤，超滤浓缩，化验配兑，精滤灌装得食品级液酶。

2.根据权利要求1所述的利用乳清粉生产酸性木聚糖酶的方法，其特征在于，详细的过程是：

一、菌种培养：

(1)菌种选取：在酸性木聚糖酶生产中，选用里氏木霉作为出发菌株，采用马铃薯培养基制成斜面种子；

(2)种母摇瓶培养：在三角瓶中装入种母培养基，灭菌后冷却至室温，接入一环斜面种子，置于摇床，培养温度28±1℃的条件下培养30±2小时；

二.生产种子培养：

(1)一级种子培养：

a.在不锈钢种子罐中加入种子培养基量占罐子容积的70～75％，蒸汽灭菌121℃，罐压0.1～0.12Mpa，时间25-35min，冷却至27～28℃备用；种子培养基的各组份配比：糖1～3％、玉米浆1～3％、无机盐1～3％、微量元素0.001～0.0026％、其余为水，PH为4.8～5.0；

b.利用火焰灭菌法将培养好的种子在无菌状态下接入种子罐；

c.培养条件：温度27～28℃，罐压0.05～0.1Mpa，通风比1∶0.7～1.0，培养时间16～20小时；

(2)二级种子培养：

a.在不锈钢种子罐中加入种子培养基量占罐子容积的70～75％，蒸汽灭菌121℃，罐压0.1～0.12Mpa，时间25-35min；冷却至27～28℃备用；种子培养基的各组份配比：糖1～3％、玉米浆1～3％、无机盐1～2％、微量元素0.001～0.0026％、其余为水，pH为5.0～5.5；

b.将培养好的种子在无菌状态下接入二级种子罐；

c.培养条件：温度27～28℃，罐压0.05～0.1Mpa，通风比1∶1～1.5，培养时间6～8小时；

三、发酵：

a.在不锈钢发酵罐中加入发酵培养基量占罐子容积的55～60％，蒸汽灭菌121℃，罐压0.1～0.12Mpa，时间25-35min；冷却至27～28℃备用；发酵培养基的各组份配比：糖0.5～6％、玉米浆1～3％、无机盐0.5～4％、纤维物质1～2％、微量元素0.001～0.0026％、其余为水，PH为4.5～5.0；

b.将培养好的种子在无菌状态下接入发酵罐；

c.培养条件：温度27～28℃，罐压0.03～0.06Mpa，通风比1∶0.8～1.2，培养时间120～150小时；

当DE值从最高处开始下降后，每小时脉冲流加补料一次，控制发酵液DE值2.0-2.5；

发酵过程中采用连续加氨控制PH在4.5～4.8，发酵酶活450～500万ug/ml(g).min；

四、产品提取：

将发酵液直接用板框压滤机进行二次过滤，取其滤液在低温条件下超滤浓缩3～4倍，测定超滤浓缩酶液酶活力单位及其它各项理化指标，调配成标准酶活力单位，并添加滤液重量5～10％的山梨醇、食盐和苯甲酸钠稳定剂，进行终端精滤罐装，制成高纯度、高单位的食品级液体木聚糖酶制剂产品。

3.根据权利要求1所述的利用乳清粉生产酸性木聚糖酶的方法，其特征在于，将食品级液体酸性木聚糖酶产品，用淀粉或膨化淀粉为吸附载体，干燥、粉碎制成食品级固体酸性木聚糖酶制剂产品，干燥温度为50～60℃。

4.根据权利要求1所述的利用乳清粉生产酸性木聚糖酶的方法，其特征在于，将食品级液体酸性木聚糖酶产品，用喷雾干燥、粉碎制成食品级固体酸性木聚糖酶制剂产品。

5.根据权利要求2所述的利用乳清粉生产酸性木聚糖酶的方法，其特征在于，上述发明中的生产酸性木聚糖酶的碳源，即糖为乳清粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、木糖、果糖、麦芽糖中的二种。

6.根据权利要求2所述的利用乳清粉生产酸性木聚糖酶的方法，其特征在于，上述发明中的生产酸性木聚糖酶的无机盐是指(NH₄)₂SO₄、KH₂PO₄、MgSO₄、CaCl₂、K₂HPO₄、NaNO₃中的四种。